正在加载图片...
将组织块投入10%甲醛固定液,固定12~24h。借助固定液中的化学成分,沉淀或凝固组织、细 胞内的蛋白质、脂肪、糖和酶等成分,从而保持其生活状态时的形态结构。 注意柔软组织不宜切成小块,可先取较大组织块,固定数小时后再分割成小块组织继续固定。取 材时要保持器官、组织的完整性 2.修整组织块与冲洗组织固定后,即可用单面刀片将其修整为所需大小。通常为0.5cm×0.5cm×0.2cm 厚度不能超过2mm。 微流自来水冲洗 3.脱水、透明与浸蜡采用自动脱水仪,可自动完成脱水、透明与浸蜡过程。 首先,制作标签,连同冲洗干净的组织块一同放入脱水盒中,盖好盖子。启动仪器。 ①脱水从70%乙醇开始,组织块经80%、90%、95%至无水乙醇逐级更换,最后完全置换出组织 中水分。 ②透明用透明剂除去组织中乙醇,使组织块透明。 ③浸蜡透明好的组织块浸入石蜡,经4~6次更换石蜡,每次30min,总浸蜡时间为2~3h。浸蜡即 可除去组织中的二甲苯,又可浸入组织,凝固后作为支持剂使组织变硬,便于切成薄片。注意浸蜡 时间不宜过长,否则会使组织变脆,影响切片 (2)将石蜡倒入包埋器中,用摄子将浸好蜡的组织块迅速移入包埋器,切面朝下放置好,待蜡面形 成一层薄膜时,迅速放入水中,至完全凝固后取出。 5.修蜡块和切片用单面刀片将包有组织块的蜡块分割为以组织块为中心的正方形或长方形蜡块,然 后在蜡块地面修成一组织块为中心、组织边距为2mm,高3~5mm的正方形或长方形蜡块。注意蜡块 相对的两个边须平行,以免出现不规则蜡带。 将修整齐的蜡块固定于切片机的台座上,连续切片。 6.展片与贴片从切片机上取下蜡带,用单面刀片在两蜡片间分开后,将蜡片置于展片机水域中展 片。待蜡片皱褶完全展平时,用载玻片捞取水中蜡片,并放置干片机上干燥待用。 7HE染色是将干燥脱蜡后的切片浸于染料溶液中,使组织和细胞的不同结构着染。染色步骤如 下: ①切片染色前处理切片先浸入二甲苯1、Ⅲ脱蜡,后浸入无水乙醇、Ⅱ,再依次浸入95%、80%及 70%乙醇逐渐获水,最后浸入蒸馏水中,待染。 ②苏木精染色将获水切片置于苏木精染液中,染色。自来水冲洗,70%分色,自来水兰化,蒸 馏水冲洗。 ③伊红染色将切片依次置入70%、80%、90%乙醇中逐级脱水,再置入伊红染液染色1mi,95% 乙醇1、Ⅱ,自来水洗,70%分色,无水乙醇、继续脱水,二甲苯1、Ⅱ透明。 8封片从二甲苯中取出载玻片,用纱布迅速擦去组织片周围和底面的二甲苯,并在组织片面上滴加 树胶,封片,干燥。 9.观察切片使用生物学显微镜观察已制备的组织切片。 将组织块投入10%甲醛固定液,固定12~24h。借助固定液中的化学成分,沉淀或凝固组织、细 胞内的蛋白质、脂肪、糖和酶等成分,从而保持其生活状态时的形态结构。 注意柔软组织不宜切成小块,可先取较大组织块,固定数小时后再分割成小块组织继续固定。取 材时要保持器官、组织的完整性。 2.修整组织块与冲洗 组织固定后,即可用单面刀片将其修整为所需大小。通常为0.5cm×0.5cm×0.2cm, 厚度不能超过2mm。 微流自来水冲洗。 3.脱水、透明与浸蜡 采用自动脱水仪,可自动完成脱水、透明与浸蜡过程。 首先,制作标签,连同冲洗干净的组织块一同放入脱水盒中,盖好盖子。启动仪器。 ①脱水 从70%乙醇开始,组织块经80%、90%、95%至无水乙醇逐级更换,最后完全置换出组织 中水分。 ②透明 用透明剂除去组织中乙醇,使组织块透明。 ③浸蜡 透明好的组织块浸入石蜡,经4~6次更换石蜡,每次30min,总浸蜡时间为2~3h。浸蜡即 可除去组织中的二甲苯,又可浸入组织,凝固后作为支持剂使组织变硬,便于切成薄片。注意浸蜡 时间不宜过长,否则会使组织变脆,影响切片。 (2)将石蜡倒入包埋器中,用镊子将浸好蜡的组织块迅速移入包埋器,切面朝下放置好,待蜡面形 成一层薄膜时,迅速放入水中,至完全凝固后取出。 5.修蜡块和切片 用单面刀片将包有组织块的蜡块分割为以组织块为中心的正方形或长方形蜡块,然 后在蜡块地面修成一组织块为中心、组织边距为2mm,高3~5mm的正方形或长方形蜡块。注意蜡块 相对的两个边须平行,以免出现不规则蜡带。 将修整齐的蜡块固定于切片机的台座上,连续切片。 6.展片与贴片 从切片机上取下蜡带,用单面刀片在两蜡片间分开后,将蜡片置于展片机水域中展 片。待蜡片皱褶完全展平时,用载玻片捞取水中蜡片,并放置干片机上干燥待用。 7.H·E染色 是将干燥脱蜡后的切片浸于染料溶液中,使组织和细胞的不同结构着染。染色步骤如 下: ①切片染色前处理 切片先浸入二甲苯Ⅰ、Ⅱ脱蜡,后浸入无水乙醇Ⅰ、Ⅱ,再依次浸入95%、80%及 70%乙醇逐渐获水,最后浸入蒸馏水中,待染。 ②苏木精染色 将获水切片置于苏木精染液中,染色。自来水冲洗,70%分色,自来水兰化,蒸 馏水冲洗。 ③伊红染色 将切片依次置入70%、80%、90%乙醇中逐级脱水,再置入伊红染液染色1min,95% 乙醇Ⅰ、Ⅱ,自来水洗,70%分色,无水乙醇Ⅰ、Ⅱ继续脱水,二甲苯Ⅰ、Ⅱ透明。 8.封片 从二甲苯中取出载玻片,用纱布迅速擦去组织片周围和底面的二甲苯,并在组织片面上滴加 树胶,封片,干燥。 9.观察切片 使用生物学显微镜观察已制备的组织切片
<<向上翻页向下翻页>>
©2008-现在 cucdc.com 高等教育资讯网 版权所有