Ⅱ.链霉素抗性突变株的筛选 一实验目的 以紫外线诱变获得大肠杆菌的链霉素抗性突变株为例，学习微生物诱变有种的基本技 术。 二实验材料和用具 菌种：大肠杆菌E.colh 培养基：营养肉汤、营养琼脂、营养琼脂+S、生理盐水等 链霉素溶液：母液2mgml:终浓度8ugml 仪器：紫外诱变箱、超净工作台、红灯、铁筒、离心机、混合仪等 三实验原理 链霉素属氮基糖昔类抗生素。细菌对氨基糖昔类抗生素产生耐药性的作用机理主要 有以下几种：其一，细菌产生相应的纯化酶对进人胞内的活性分子进行修饰，令其失去生物 活性：其二，氨基糖昔类抗生素的作用靶位核糖体或是与核糖体结合的核蛋白的氨基酸发生 突变而使进人胞内的该类抗生素不能与之结合或结合力下降：其它机理，包括细胞膜的通透 性下降等。细菌对链霉素产生抗药性的作用机理属于第二种。链霉素抗性是由于编码核糖体 蛋白S12的psL基因或其它基因发生突变导致核糖体或核糖体蛋自发生改变而产生。 四操作步骤 1.出发菌株转接营养肉汤斜面活化： 2.菌株的培养、细胞的收集和离心、紫外诱变处理同实验二： 3.将诱变前、后的菌悬液各取0.5ml,进行适当的稀释分离，然后用倾注法进行平板菌落 计数：并选择诱变处理前合适浓度的菌悬液涂布营养琼脂+Sr平板(Str终浓度8ug/ml), 培养后记录抗性菌落数，计算该菌的自发突变率： 4.另取1ml诱变处理好的菌悬液接入液体营养肉汤液体培养基进行后培养，37℃120pm 摇瓶培养： 5.对后培养以后的菌悬液进行平板菌落计数和抗性茵落数计数，观察紫外诱变的效果。Ⅱ. 链霉素抗性突变株的筛选 一 实验目的 以紫外线诱变获得大肠杆菌的链霉素抗性突变株为例，学习微生物诱变育种的基本技 术。 二 实验材料和用具 菌种：大肠杆菌 E.coli 培养基：营养肉汤、营养琼脂、营养琼脂+Str、生理盐水等 链霉素溶液：母液 2mg/ml；终浓度 8g/ml 仪器：紫外诱变箱、超净工作台、红灯、铁筒、离心机、混合仪等 三 实验原理 链霉素属氮基糖昔类抗生素。细菌对氨基糖昔类抗生素产生耐药性的作用机理主要 有以下几种:其一，细菌产生相应的钝化酶对进人胞内的活性分子进行修饰，令其失去生物 活性；其二，氨基糖昔类抗生素的作用靶位核搪体或是与核糖体结合的核蛋白的氨基酸发生 突变而使进人胞内的该类抗生素不能与之结合或结合力下降；其它机理，包括细胞膜的通透 性下降等。细菌对链霉素产生抗药性的作用机理属于第二种。链霉素抗性是由于编码核糖体 蛋白 S12 的 rpsL 基因或其它基因发生突变导致核糖体或核糖体蛋自发生改变而产生。 四 操作步骤 1. 出发菌株转接营养肉汤斜面活化； 2. 菌株的培养、细胞的收集和离心、紫外诱变处理同实验二； 3. 将诱变前、后的菌悬液各取 0.5ml，进行适当的稀释分离，然后用倾注法进行平板菌落 计数；并选择诱变处理前合适浓度的菌悬液涂布营养琼脂+Str 平板（Str 终浓度8g/ml）， 培养后记录抗性菌落数，计算该菌的自发突变率； 4. 另取 1ml 诱变处理好的菌悬液接入液体营养肉汤液体培养基进行后培养，37℃120rpm 摇瓶培养； 5. 对后培养以后的菌悬液进行平板菌落计数和抗性菌落数计数，观察紫外诱变的效果