玻璃化冷冻法与冷冻卵子 王子珩14302010026 前言 在当代,由于生殖系统随年龄増长的退化,加上晩婚晩育的趋势,出现了冷冻精子 卵子的做法。人们将自己健康的生殖细胞进行冷冻,几年后取出进行体外授精,从而避免了 年龄或身体原因对生殖的影响。而这其中的关键技术,就在于对精卵子的冷冻技术。目前国 际上最为推崇的方法,就是玻璃化冷冻法 技术原理 bi\bsse 玻璃化冷冻法的基本原理是将卵子放置在高浓度的、极其粘稠的冷冻保护剂溶液中 进行短时的预平衡后,投入液氮,使其在超低温环境下凝固,形成不规则的玻璃化样固体。 所保存细胞在冷冻保护液中脱水到一定程度后,则引起内源性胞质大分子如蛋白质及渗透到 胞内的冷冻保护剂浓缩,从而使细胞在剧烈的快速降温中得到保护。同时由于冷却过程中黏 度高,又无冰晶形成,因此避免了冰晶形成时对细胞脂质膜以及细胞骨架结构的损伤,保存 了细胞内外液体正常的分子和离子分布,因而在细胞内发生玻璃化时能起到保护作用。 技术应用 玻璃化冷冻法由于其对细胞的保护性较好,目前主要应用于胚胎细胞的冷冻,包括冷 冻精子、卵子和不同时期的胚胎。 冷冻精子的步骤 (1)首先进行传染病筛査等检查,包括乙肝、丙肝、艾滋病、梅毒、淋病、支原 体、衣原体、肝功能和血型检测。 (2)如一切结果无明显异常,可进行精液冻苏实验。每个男性精液对冷冻的耐受性 有所不同,更何况肿瘤患者的生精功能可能已遭到肿瘤的破坏,精液冷冻复苏后的精子存活 率无法估计。因此,冻苏实验十分必要,可帮助医生预测以后生育方式的选择。 (3)以上两种检査都通过后,临床上将通过自慰射出的精液收集,取少量做抽样检 查后,剩下的加入冷冻保护剂,投入液氮迅速冷冻起来。玻璃化冷冻法与冷冻卵⼦ 王⼦珩 14302010026 前⾔ 在当代，由于⽣殖系统随年龄增长的退化，加上晚婚晚育的趋势，出现了冷冻精⼦、 卵⼦的做法。⼈们将⾃⼰健康的⽣殖细胞进⾏冷冻，⼏年后取出进⾏体外授精，从⽽避免了 年龄或⾝体原因对⽣殖的影响。⽽这其中的关键技术，就在于对精卵⼦的冷冻技术。⽬前国 际上最为推崇的⽅法，就是玻璃化冷冻法。 ⼀、技术原理 玻璃化冷冻法的基本原理是将卵⼦放置在⾼浓度的、极其粘稠的冷冻保护剂溶液中， 进⾏短时的预平衡后，投⼊液氮，使其在超低温环境下凝固，形成不规则的玻璃化样固体。 所保存细胞在冷冻保护液中脱⽔到⼀定程度后，则引起内源性胞质⼤分⼦如蛋⽩质及渗透到 胞内的冷冻保护剂浓缩，从⽽使细胞在剧烈的快速降温中得到保护。同时由于冷却过程中黏 度⾼，又⽆冰晶形成，因此避免了冰晶形成时对细胞脂质膜以及细胞⾻架结构的损伤，保存 了细胞内外液体正常的分⼦和离⼦分布，因⽽在细胞内发⽣玻璃化时能起到保护作⽤。 ⼆、技术应⽤ 玻璃化冷冻法由于其对细胞的保护性较好，⽬前主要应⽤于胚胎细胞的冷冻，包括冷 冻精⼦、卵⼦和不同时期的胚胎。 冷冻精⼦的步骤： （1）⾸先进⾏传染病筛查等检查，包括⼄肝、丙肝、艾滋病、梅毒、淋病、⽀原 体、⾐原体、肝功能和⾎型检测。 （2）如⼀切结果⽆明显异常，可进⾏精液冻苏实验。每个男性精液对冷冻的耐受性 有所不同，更何况肿瘤患者的⽣精功能可能已遭到肿瘤的破坏，精液冷冻复苏后的精⼦存活 率⽆法估计。因此，冻苏实验⼗分必要，可帮助医⽣预测以后⽣育⽅式的选择。 （3）以上两种检查都通过后，临床上将通过⾃慰射出的精液收集，取少量做抽样检 查后，剩下的加⼊冷冻保护剂，投⼊液氮迅速冷冻起来