含0.03%2 AF标准饲料. 乙基亚硝胺诱发 大鼠肝 用剂量为每日0 3~14mgg体重，混于饲料或饮水中给予， 个月后255/300大鼠发生了肝癌。亚胺甚偶氮甲苯(0AAT)诱发 鼠肝：用1%OAAF苯溶液（约0.Iml含1mg) 涂在动物的两肩钾 隔日 次。每次2一3滴 般涂100次，买验后7~8周脚而出现 个肝肿瘤，7个月以上可诱发小息肝肿瘤约55%，或用2.5 mgOAAT溶于葵瓜子油中，给C3H小皮下注射4次，每日间隔10天，也可诱发成肝 癌。黄曲霉素诱发大鼠肝癌：每日饲料中含0.001 0.015ppi 混入饲料中喂6个月后，肝诱发华达80%， 胃癌甲基胆蒽诱发小鼠胃癌： 取20g左右的小鼠，无茵手术下，在腺胃粘膜面穿挂含甲基胆葱(MC)线结，含MC的线结是用言通细 线，在一端打结后，将线结置于盛有MC小玻璃试管内，在酒精灯上微微加温，使MC液化渗入线结。MC浓度为0.05~0.1g20甲基胆葱内浸入 10~20根线。手术埋线后4~8个月可诱发成功。用不对称亚胺，剂量为0.25mg体重，3个月后全部动物发生前胃乳头状癌，7~8个月 后有85-100%发生前胃癌。昆明种最敏感，A系次之，615系小鼠敏感性最差。此外还可用甲基亚硝基酸尿素给BD大鼠饮水中加2mgkg体 重，每周5次饮用，520天后全部大最均发生了象胃癌。 3.合管偏甲基苄基亚硝胺(MBNA)诱发大鼠合管癌：取体重100g以上的Wis大鼠，任其合用含甲基苄基亚硝胺的饮水，并将 MBNA掺入饲料中使每日摄入量达0.75~1.5mgkg体重.80~100天可诱发成食管癌。也可用二烃黄樟素(Dihydrosafrole),它是一种制备啤 酒的调味品，在大鼠饲料中加入百万分之二干五百至一万(2500~10000ppm)黄樟素，就能引起20~75%的食管癌。用0.2%或0.005%的甲基 苄基亚硝酸水溶液，给动物经口灌喂，每天一次，大鼠灌注剂量为1mkg体重，至第27天即发现一例食管乳头状瘤，154天发现第一例食管 癌，11个月食管篇的发生率为53%： 4。违德一乙基亚硝胺(DEN)透发小息肺克：小白息每周皮下注射1%DEN水溶液一次，每次剂量56m/业g,DEN总剂量达到868m日 观察时间为100天左右时，发癌宰可达40%，而DEN总剂量达到1176mg,观察时间为半年左右时：发癌率可达94%。乌拉坦诱发肺腺癌：小园 (4系，1~11/2月龄)较大鼠敏感，每次每只腹腔注入109%乌拉坦生理盐水液0.1~0.3ml,间隔3~5日再注，共注2~3个月，每只小鼠用量约 为100mg,注后3个月肺腺瘤发生率为100%，而且多数为多发性，这种诱发密为良性。此外还可用气管内注入苯并花、硫酸铵气溶胶、甲基胆 蒽等诱发肺癌。如猴气管内注入3,4苯井花（苯并花为3~15mg与等量之F203混合液），每周一次，共10次，6只猴中有2只诱发肺的鳞状上 皮癌。亦有人用硫酸胺气溶剂给100只大鼠吸入，13个月后所有大鼠都发生了肺骤癌。用0,2%明胶作悬浮剂将甲基胆蒽混合后给金地鼠气管内 注入，每次0.1ml(含甲基胆葱5mg)每周一次，共6次，53周后有62.5%动物发生了肺癌. 5,岛明克一甲基阳菌C)透发大品离明德：取直径2mm的硬质超米管在酒精灯上小火拉成锥形。每段长约；5cm,管内填以结 品体MC,小管一端用火封闭，以防药物外溢，尖端用针刺数孔，使MC能从小妃溢出，取体重120g左右的大白品，雌维均可，乙硅麻醉后，由 前鼻孔将上述含MC的塑料小管插入鼻腔，利用前鼻孔较小管粗端为小的特点，稍加用力，迫使小管全部进入鼻腔内，其尖部可达鼻咽腔。不 需另加固定，即可使小管长期留于鼻腔内。待到须定时间（半年以上），或动物自行死亡时，到其鼻咽部，10%福尔马林固定，脱钙后，石蜡 包埋，进行连续切片。发癌率可达60%以上，二乙基亚硝胺滴鼻法诱发鼻咽癌：取120左右大白鼠，雌雄均可，乙醚麻醉后，用窄平针尖的8 号针头，从前鼻孔轻轻插入，针尖可达鼻咽腔。经注射器灌注用1%吐温-80新配的33.3%DEN混显液0.02m(含DEN6.7mg)每周1次，共15~20 次，可诱发成鼻烟篇。 6.宫颈癌取雄性小白鼠，以附有0.1mgMC的棉纱线结在动物不麻醉的状态下，借助于阴道扩张器及磨纯的弯针，将线穿入宫颈。经右 宫角背部穿出，使线结固定于宫颈口。线的另一端则固定于背部肌肉，缝合皮肤，挂线以后，同日开始连续注射吉霉素2~3天。以防术后感 染。至一定时间（半年左右）处死动物。宫颈组织用10%描尔马林固定，石蜡包埋，连续切片 ,结肠给四周龄的雄性大白鼠，皮下注射二甲甚苄肼（.DMH)每用一次，连续21周，每次DMH2Imgg,最后 次给药后1-4周，处死动物，降结肠部位用Boun液固定，聪水，石蜡包埋，切片。所用之DMH先配成每100ml含400mg的母液，并加 EDTA37mg,用氢氧化纳(0.1N)液将DH调至6.S备用. 目前临床所用的抗肿药中，大多数是经动物移植性肿试验筛选而发现的。应用动物移植性钟筛选药物的优点是：使一群动物同时接 种同样量的细，生长速率比较 一致。个体关是较小，接种成话率近100%， 易于客观判断疗效，可在回种或同品系对 物中连续移植，长期保留供试验用，试验周 一均较短，试验条件易于控制等。因此日前抗肿瘤药筛选大多数采用动物移植窄作为筛选 甲。且前世上保存的动物移植融离约有40性，但储选试验国者仅 人的常的密性6 小鼎子宫颈瘤27号（U27 细跑 人肝容移植和人脑恶性胶质细 1)等 动物肿密可通过移植传代而培养出所需要的 田株。株是一 型和生长特性把趋稳定，并能在同系或同种动物中连续传代 的时实 相当于活体组织培新 长相 的 一定数量的细胞注入受体 动物腹腔形成腹水瘤或产生 式同系动物植不 生排 可结合注射肾上腺 、抗肿瘤药物和适当量的放射等方法，降低宿主免疫 排反应 移植始于 ① 接种于皮下或 但排斥作用 ②动物 免的 不能 于动 肿 个初 1983年B0dgen等人用无胸最大鼠 膜下移 人体种 全部实验仅需引！天 且命中率 这项 作为 米了榴 0年 立可 生人体 密株能防 传代件随 退化 1969年Rygaaid 首次成功地将人类 密移于无胸裸小鼠，这为异种动物肿控移植开辟了新局面。由于裸小鼠缺乏T淋巴细胞功能 人是极为理想的肿鹿移植模型材料 料中维生素B2不应超过1.5～2mg/kg，4～6月就有大量的肝癌诱发成功。2-乙酰氨基酸（2AAF）诱发小鼠、狗、猫、鸡、兔肝癌：给成年大鼠 含0.03%2AAF标准饲料。每日每平均2～3mg2AAF（也可将2AAF混于油中灌喂），3～4月后有80～90%动物产生肝肿瘤。二乙基亚硝胺诱发 大鼠肝癌：用剂量为每日0.3～14mg/kg体重，混于饲料或饮水中给予，6～9个月后255/300大鼠发生了肝癌。亚胺基偶氮甲苯（OAAT）诱发小 鼠肝癌：用1%OAAF苯溶液（约0.1ml含1mg）涂在动物的两肩胛间皮肤上，隔日一次，每次2～3滴，一般涂100次。实验后7～8周即而出现第 一个肝肿瘤，7个月以上可诱发小鼠肝肿瘤约55%。或用2.5mgOAAT溶于葵瓜子油中，给C3H小鼠皮下注射4次，每日间隔10天，也可诱发成肝 癌。黄曲霉素诱发大鼠肝癌：每日饲料中含0.001～0.015ppm，混入饲料中喂6个月后，肝癌诱发率达80％。 2．胃癌 甲基胆蒽诱发小鼠胃癌：取20g左右的小鼠，无菌手术下，在腺胃粘膜面穿挂含甲基胆蒽（MC）线结。含MC的线结是用普通细 线，在一端打结后，将线结置于盛有MC小玻璃试管内，在酒精灯上微微加温，使MC液化渗入线结。MC浓度为0.05～0.1g20-甲基胆蒽内浸入 10～20根线。手术埋线后4～8个月可诱发成功胃癌。用不对称亚硝胺，剂量为0.25ml/kg体重，3个月后全部动物发生前胃乳头状癌，7～8个月 后有85～100%发生前胃癌。昆明种最敏感。A系次之，615系小鼠敏感性最差。此外还可用甲基亚硝基醋酸尿素给BD大鼠饮水中加2mg/kg体 重，每周5次饮用，520天后全部大鼠均发生了腺胃癌。 3．食管癌 甲基苄基亚硝胺（MBNA）诱发大鼠食管癌：取体重100g以上的Wistar大鼠，任其食用含甲基苄基亚硝胺的饮水，并将 MBNA掺入饲料中使每日摄入量达0.75～1.5mg/kg体重。80～100天可诱发成食管癌。也可用二烃黄樟素（Dihydrosafrole），它是一种制备啤 酒的调味品，在大鼠饲料中加入百万分之二千五百至一万（2500～10000ppm）黄樟素，就能引起20～75%的食管癌。用0.2%或0.005%的甲基 苄基亚硝胺水溶液，给动物经口灌喂，每天一次，大鼠灌注剂量为1mg/kg体重，至第27天即发现一例食管乳头状瘤，154天发现第一例食管 癌，11个月食管癌的发生率为53%。 4．肺癌 二乙基亚硝胺（DEN）诱发小鼠肺癌：小白鼠每周皮下注射1%DEN水溶液一次，每次剂量56mg/kg，DEN总剂量达到868mg， 观察时间为100天左右时，发癌率可达40%。而DEN总剂量达到1176mg，观察时间为半年左右时；发癌率可达94%。乌拉坦诱发肺腺癌：小鼠 （A系，1～11/2月龄）较大鼠敏感，每次每只腹腔注入10%乌拉坦生理盐水液0.1～0.3ml，间隔3～5日再注，共注2～3个月，每只小鼠用量约 为100mg，注后3个月肺腺癌发生率为100%，而且多数为多发性，这种诱发瘤为良性。此外还可用气管内注入苯并芘、硫酸铵气溶胶、甲基胆 蒽等诱发肺癌。如猴气管内注入3，4苯并芘（苯并花为3～15mg与等量之Fe2O3混合液），每周一次，共10次，6只猴中有2只诱发肺的鳞状上 皮癌。亦有人用硫酸胺气溶剂给100只大鼠吸入，13个月后所有大鼠都发生了肺腺癌。用0.2%明胶作悬浮剂将甲基胆蒽混合后给金地鼠气管内 注入，每次0.1ml（含甲基胆蒽5mg）每周一次，共6次，53周后有62.5%动物发生了肺癌。 5．鼻咽癌 二甲基胆蒽（MC）诱发大鼠鼻咽癌：取直径2～3mm的硬质塑米管，在酒精灯上小火拉成锥形，每段长约3.5cm，管内填以结 晶体MC。小管一端用火封闭，以防药物外溢，尖端用针刺数孔，使MC能从小妃溢出。取体重120g左右的大白鼠，雌雄均可，乙醚麻醉后，由 前鼻孔将上述含MC的塑料小管插入鼻腔，利用前鼻孔较小管粗端为小的特点，稍加用力，迫使小管全部进入鼻腔内，其尖部可达鼻咽腔。不 需另加固定，即可使小管长期留于鼻腔内。待到预定时间（半年以上），或动物自行死亡时，到其鼻咽部，10%福尔马林固定，脱钙后，石蜡 包埋，进行连续切片。发癌率可达60%以上。二乙基亚硝胺滴鼻法诱发鼻咽癌：取120g左右大白鼠，雌雄均可，乙醚麻醉后，用磨平针尖的8 号针头，从前鼻孔轻轻插入，针尖可达鼻咽腔。经注射器灌注用1%吐温-80新配的33.3%DEN混悬液0.02ml(含DEN6.7mg)每周1次，共15～20 次，可诱发成鼻咽癌。 6．宫颈癌 取雌性小白鼠，以附有0.1mgMC的棉纱线结在动物不麻醉的状态下，借助于阴道扩张器及磨纯的弯针，将线穿入宫颈。经右 宫角背部穿出，使线结固定于宫颈口。线的另一端则固定于背部肌肉，缝合皮肤，挂线以后，同日开始连续注射青霉素2～3天。以防术后感 染。至一定时间（半年左右）处死动物，宫颈组织用10%福尔马林固定，石蜡包埋，连续切片。 7．结肠癌 给四周龄的雄性大白鼠，皮下注射二甲基苄肼（Dimethlhydrazine,DMH）每周一次，连续21周，每次DMH21mg/kg。最后一 次给药后1～4周，处死动物。降结肠部位用Bouin液固定，脱水，石蜡包埋，切片。所用之DMH先配成每100ml含400mg的母液，并加 EDTA37mg，用氢氧化纳（0.1N）液将pH调至6.5备用。 （二）移植性肿瘤动物模型 目前临床所用的抗肿瘤药中，大多数是经动物移植性肿瘤试验筛选而发现的。应用动物移植性肿瘤筛选药物的优点是：使一群动物同时接 种同样量的瘤细胞，生长速率比较一致，个体差异较小，接种成活率近100%，对宿主的影响相类似，易于客观判断疗效，可在同种或同品系动 物中连续移植，长期保留供试验用，试验周期一般均较短，试验条件易于控制等。因此目前抗肿瘤药筛选大多数采用动物移植瘤作为筛选模 型。目前世界上保存的动物移植肿瘤约有400株，但筛选试验常用者仅20～30种。据1984年统计，我国在同系、同种动物中已建立各种动物和 人的常见的瘤株64个。例如小鼠肺腺瘤（HP615）、小鼠子宫颈瘤27号（U27）、小鼠脑瘤22（B22）、小鼠淋巴细胞性血病（L615）、裸鼠 人肝瘤移植瘤和人脑恶性胶质细胞瘤（NCS—1）等。 动物肿瘤可通过移植传代而培养出所需要的肿瘤细胞株。瘤株是一种组织学类型和生长特性已趋稳定，并能在同系或同种动物中连续传代 的肿瘤细胞模型。肿瘤移植于健康动物，相当于活体组织培养，可长期保存瘤种，供实验所用。 实验中常用腹水瘤和实体瘤两种方式进行移植。对于会产生腹水的肿瘤，可将其一定数量的细胞注入受体动物腹腔形成腹水瘤或产生腹 水。实体瘤移植也是在无菌条件下，把实体瘤切成2～3mm小块，植于受体动物皮下。 自体式同系动物肿瘤植不产生排导现象。同种动物移植时可结合注射肾上腺皮质激素、抗肿瘤药物和适当量的放射等方法，降低宿主免疫 排斥反应。异种动物肿瘤移植始于Leidy（1834年），难度较大。近50年来异体移植常用下列方法：①接种于皮下或粘膜下，优点是易观察， 但排斥作用大，效果欠佳。②动物肿瘤移植于鸡胚尿囊膜。特点是较易存活，但人类肿瘤无成功报导。③人类肿瘤接种于大鼠、豚鼠、兔的眼 前房。缺点是细胞不能传代。④移植于动物脑内。肿瘤生长快，但难度大，不易观察。1983年Bodgen等人用无胸腺大鼠肾包膜下移植人体肿瘤 筛选新药，全部实验仅需11天，且命中率高，这项工作为临床病人的药物筛选带来了福音。 60年代以来国外已建立可移植性人体肿瘤数百种，这些瘤株能防止由传代伴随的形成和功能的退化。1969年Rygaaid首次成功地将人类肿 瘤移于无胸腺裸小鼠，这为异种动物肿瘤移植开辟了新局面。由于裸小鼠缺乏T淋巴细胞功能，所以是极为理想的肿瘤移植模型材料