(3)待到组织块周围长出单细胞层后将组织块剔除,便可收获细胞或进行 传代培养。 (4)胰蛋白酶消化的时间长短与组织细胞的幼嫩程度、数量以及酶的活力 等因素密切相关,另外在消化过程中应密切观察,及时吹打,避免消化过度 、细胞传代培养 当细胞在培养瓶长成致密的单层后,通常已经没有足够的生长空间和营养条 件满足细胞进一步生长的需求。为使细胞能继续生长,同时使细胞的数量扩大, 就必须进行传代再培养。同时,传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法,也 是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。通常,悬浮型细胞可通过直接补充培 养基后再分瓶的方法进行传代,方法相对简单,而贴壁细胞则需经消化后才能分 瓶培养。 (一)所需设备与试剂 超净工作台、细胞培养箱、离心机、离心管、倒置显微镜、吸管、废液缸、 培养瓶、移液管、添加有0.02%EDTA的0.25%胰蛋白酶消化液、RPMI1640细 胞培养基(添加有10%FBS)、 Hanks液等。 (二)操作步骤 贴壁细胞的传代培养 1)将长满细胞的培养瓶中原来的培养液弃去。 (2)加入1~2m1025%胰酶溶液,使所有细胞都能被浸入到溶液中,室温 或37℃消化。 (3)利用倒置显微镜或肉眼观察细胞的消化状况。随着时间的推移,原本 贴壁的细胞会逐渐变圆,并开始脱落。 (4)待到消化充分后,及时加入10 ml Hanks液终止消化。 (5)用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液,转移至一离心管中,1000pm,离 心5min,弃上清液。 (6)用10~15ml新鲜培养基重悬细胞,并将其分装到两至三个培养瓶中, 37℃下继续培养。 (7)过夜观察细胞的贴壁及生长状况。（3）待到组织块周围长出单细胞层后将组织块剔除，便可收获细胞或进行 传代培养。 （4） 胰蛋白酶消化的时间长短与组织细胞的幼嫩程度、数量以及酶的活力 等因素密切相关，另外在消化过程中应密切观察，及时吹打，避免消化过度。 二、细胞传代培养 当细胞在培养瓶长成致密的单层后，通常已经没有足够的生长空间和营养条 件满足细胞进一步生长的需求。为使细胞能继续生长，同时使细胞的数量扩大， 就必须进行传代再培养。同时，传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法，也 是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。通常，悬浮型细胞可通过直接补充培 养基后再分瓶的方法进行传代，方法相对简单，而贴壁细胞则需经消化后才能分 瓶培养。 （一）所需设备与试剂 超净工作台、细胞培养箱、离心机、离心管、倒置显微镜、吸管、废液缸、 培养瓶、移液管、添加有 0.02%EDTA 的 0.25%胰蛋白酶消化液、RPMI 1640 细 胞培养基（添加有 10％FBS）、Hanks 液等。 （二）操作步骤 1．贴壁细胞的传代培养 （1）将长满细胞的培养瓶中原来的培养液弃去。 （2）加入 1～2ml 0.25％胰酶溶液，使所有细胞都能被浸入到溶液中，室温 或 37℃消化。 （3）利用倒置显微镜或肉眼观察细胞的消化状况。随着时间的推移，原本 贴壁的细胞会逐渐变圆，并开始脱落。 （4）待到消化充分后，及时加入 10ml Hanks 液终止消化。 （5）用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液，转移至一离心管中，1000rpm，离 心 5min，弃上清液。 （6）用 10～15ml 新鲜培养基重悬细胞，并将其分装到两至三个培养瓶中， 37℃下继续培养。 （7）过夜观察细胞的贴壁及生长状况