14.5%,浙枯草杄菌仅可得2%左右。根据这些结果采用枯草杆菌不太合适,除非其 具有产物的高效分泌系统。 从生物安全性考虑,培养的基因工程菌通常是维生素或氨基酸的营养缺陷型突 变株。培养过程细胞对维生素需求量甚微,在培养开始即加入必需量对细胞生长并 无影响,但培养一开始即加入足够量氨基酸则可能因氨基酸浓度过大而抑制细胞生 长。在此情况下,可采取培养过程中,在调节p值同时补加氨基酸混合物和葡萄 糖的方法,以便培养过程葡萄糖及氨基酸浓度的基本恒定,从而实现髙密度培养, 如E.colC600株培养时可获得6%干菌体。但菌体对葡萄糖及氨基酸的收率因培 养条件而异,如以葡萄糖及分别用苏氨酸、亮氨酸、组氨酸及色氨酸为底物时,则 平均每克底物所获干菌体量分别为03、2.5、15、40及40g。按每克干菌体成本计, 应用苏氨酸成本最髙,故应避免应用苏氨酸缺陷型菌株为宿主,最好选用维生素缺 陷型菌株为宿主 2、质粒稳定性 重组质粒上通常载有Ap基因,获得该类重组质粒的基因工程菌在含氨苄青霉 素培养液中可以生长,而非基因工程菌不能生长。但在基因工程菌高密度培养时 外加的抗生素AP易于失活,影响培养。为此考虑采用抗生素依赖性变异法替代抗 生素添加法。其方法是通过诱变使宿主成为某抗生素依赖性突变株(如链霉素依赖性 Samd)。只有在Sm存在下宿主才能生长,但重组质粒上含有Sm非依赖性(Sm)基因 将重组质粒导入宿主细胞后,所获克隆菌可在不含抗生素培养基中生长,而丢失质 粒菌株却不能生长。此法很有实用价值,但缺点是宿主细胞易产生回复突变,造成 培养工程复杂化,产物产率下降 为考察质粒稳定性,在此引入质粒保持率Fn的概念,F表示分批培养中细胞分 裂n次后,培养液中基因工程细胞数与总细胞数的比值,即 培养液中基因工程细胞数 培养液中细胞总数 100% 假定在分批培养过程中,细胞在对数生长期每次分裂时,其质粒丢失率为P, 则Fn为 rP-1) 式中α-质粒丢失菌株与质粒保持率菌株μ的比值; n细胞分裂次数14.5%，浙枯草杆菌仅可得 2%左右。根据这些结果采用枯草杆菌不太合适，除非其 具有产物的高效分泌系统。 从生物安全性考虑，培养的基因工程菌通常是维生素或氨基酸的营养缺陷型突 变株。培养过程细胞对维生素需求量甚微，在培养开始即加入必需量对细胞生长并 无影响，但培养一开始即加入足够量氨基酸则可能因氨基酸浓度过大而抑制细胞生 长。在此情况下，可采取培养过程中，在调节 pH 值同时补加氨基酸混合物和葡萄 糖的方法，以便培养过程葡萄糖及氨基酸浓度的基本恒定，从而实现高密度培养， 如 E．coli C600 株培养时可获得 6％干菌体。但菌体对葡萄糖及氨基酸的收率因培 养条件而异，如以葡萄糖及分别用苏氨酸、亮氨酸、组氨酸及色氨酸为底物时，则 平均每克底物所获干菌体量分别为 0.3、2.5、15、40 及 40g 。按每克干菌体成本计， 应用苏氨酸成本最高，故应避免应用苏氨酸缺陷型菌株为宿主，最好选用维生素缺 陷型菌株为宿主。 2、质粒稳定性 重组质粒上通常载有 Ap r 基因，获得该类重组质粒的基因工程菌在含氨苄青霉 素培养液中可以生长，而非基因工程菌不能生长。但在基因工程菌高密度培养时， 外加的抗生素 AP 易于失活，影响培养。为此考虑采用抗生素依赖性变异法替代抗 生素添加法。其方法是通过诱变使宿主成为某抗生素依赖性突变株(如链霉素依赖性 Smd)。只有在 Sm 存在下宿主才能生长，但重组质粒上含有 Sm 非依赖性(Smid)基因， 将重组质粒导入宿主细胞后，所获克隆菌可在不含抗生素培养基中生长，而丢失质 粒菌株却不能生长。此法很有实用价值，但缺点是宿主细胞易产生回复突变，造成 培养工程复杂化，产物产率下降。 为考察质粒稳定性，在此引入质粒保持率 Fn 的概念，Fn 表示分批培养中细胞分 裂 n 次后，培养液中基因工程细胞数与总细胞数的比值，即 假定在分批培养过程中，细胞在对数生长期每次分裂时，其质粒丢失率为 P， 则 Fn 为： 式中 α-质粒丢失菌株与质粒保持率菌株μ的比值； n-细胞分裂次数