基本原理 构建与乾基因同源(I0~15kb)的载体 外显子插有新霉素 疱疹病毒胸苷激 抗性基因（neo'》 酶(HV-tk)基因 作为正选择的标志 作为负选择 将重组体导入ES细胞 体外培养 新霉素(C418)和致死核苷类似物(GANC)作双重韩选 存活的ES细胞