荧光抗体技术是指用荧光素对抗原或抗体进行标记，然后用荧光显微镜观察所标记的荧光以分 析示踪相应的抗原或抗体的方法。该技术将血清学的特异性和敏感性与显微技术的精确性结合起 来，解决了生物学上的许多难题，如病毒的侵袭途径及其感染细胞内复制部位的研究，以及抗体的 产生部位等。随着荧光抗体技术的敏感性和特异性的进一步提高，该技术在病原微生物的早期诊 断、肿瘤抗原的研究、抗原抗体免疫组化定位等方面得到了广泛应用。 [目的要求] 1.掌握荧光抗体染色法诊断猪瘟的基本操作步骤。 2.了解荧光抗体技术的基本原理。 [材料与试剂们 1.载玻片，盖玻片，冰冻切片机，荧光显微镜， 2.0.01mol/L PBS (pH7.2). 3.缓冲甘油：优级纯甘油9份和碳酸盐缓冲液1份混合而成。 4.碳酸盐缓冲液：0.5mol/L碳酸钠1份与0.5mol/L碳酸氢钠3份混合。 5.猪瘟荧光抗体，猪瘟抗血清，病猪的扁桃体或肾脏等。 [操作方法] 1,切片制备：将冰冻的扁桃体或肾脏进行切片，置载玻片上，空气中自然干燥后，立刻在室 温下放入纯丙酮固定15min。 2.洗涤：将固定好的切片以PBs轻轻漂洗5次，每次3min。 3.染色：在晾干的标本片上滴加猪瘟荧光抗体（工作浓度），以覆盖为度，放湿盒内置37℃ 染色30min. 4.洗涤：取出标本片，以吸管吸PBS冲去玻片中的荧光抗体，然后置大量PBS中漂洗5次，每次 3min,再以蒸馏水冲洗晾干。 5.封载：染色片半干时，滴加缓冲甘油封片。 本试验需设定以下对照： (1)阳性对照：含有猪瘟病毒的组织所作的切片： (2)自发荧光对照，以PBS代替荧光抗体染色： (3)抑制试验对照，标本上加未标记的猪瘟抗血清，37℃于湿盒内中30mi后，PBS漂洗，再 加标记抗体，染色同上。 6。镜检：将染色后的标本片置荧光显微镜下观察，先用低倍物镜选择适当的标本区，然后换 高倍物镜观察。以油镜观察时，可用缓冲甘油代替香柏油。 7.结果判定 阳性对照应呈翠绿色荧光，而猪瘟自发荧光对照组和抑制试验对照组应无荧光。 荧光抗体技术是指用荧光素对抗原或抗体进行标记，然后用荧光显微镜观察所标记的荧光以分 析示踪相应的抗原或抗体的方法。该技术将血清学的特异性和敏感性与显微技术的精确性结合起 来，解决了生物学上的许多难题，如病毒的侵袭途径及其感染细胞内复制部位的研究，以及抗体的 产生部位等。随着荧光抗体技术的敏感性和特异性的进一步提高，该技术在病原微生物的早期诊 断、肿瘤抗原的研究、抗原抗体免疫组化定位等方面得到了广泛应用。 [目的要求] 1. 掌握荧光抗体染色法诊断猪瘟的基本操作步骤。 2. 了解荧光抗体技术的基本原理。 [材料与试剂] 1. 载玻片，盖玻片，冰冻切片机，荧光显微镜， 2. 0.01mol/L PBS（pH7.2）。 3. 缓冲甘油：优级纯甘油9份和碳酸盐缓冲液1份混合而成。 4. 碳酸盐缓冲液：0.5mol/L 碳酸钠1份与0.5mol/L 碳酸氢钠3份混合。 5. 猪瘟荧光抗体，猪瘟抗血清，病猪的扁桃体或肾脏等。 [操作方法] 1. 切片制备：将冰冻的扁桃体或肾脏进行切片，置载玻片上，空气中自然干燥后，立刻在室 温下放入纯丙酮固定15min。 2. 洗涤：将固定好的切片以PBS轻轻漂洗5次，每次3min。 3. 染色：在晾干的标本片上滴加猪瘟荧光抗体（工作浓度），以覆盖为度，放湿盒内置37℃ 染色30min。 4. 洗涤：取出标本片，以吸管吸PBS冲去玻片中的荧光抗体，然后置大量PBS中漂洗5次，每次 3min，再以蒸馏水冲洗晾干。 5. 封载：染色片半干时，滴加缓冲甘油封片。 本试验需设定以下对照： （1） 阳性对照；含有猪瘟病毒的组织所作的切片； （2） 自发荧光对照，以PBS代替荧光抗体染色； （3） 抑制试验对照，标本上加未标记的猪瘟抗血清，37℃于湿盒内中30min后，PBS漂洗，再 加标记抗体，染色同上。 6. 镜检：将染色后的标本片置荧光显微镜下观察，先用低倍物镜选择适当的标本区，然后换 高倍物镜观察。以油镜观察时，可用缓冲甘油代替香柏油。 7. 结果判定 阳性对照应呈翠绿色荧光，而猪瘟自发荧光对照组和抑制试验对照组应无荧光