适宜大多数细胞生长的培养基pH多维持在70-74之间,而细胞在培养过程中 所释放出的代谢产物尤其是CO2会造成培养基pH值的迅速下降,很不利于细胞的 继续生长。为了尽可能长时间的将培养基的pH值稳定在适当范围,常借助CO2 一碳酸氢盐缓冲体系或有机缓冲体系(如 HEPES)来解决这一问题。下面的反应 式可以用来说明CO2-碳酸氢盐缓冲体系的作用原理。 Nahco3+H2O←→Na+OH+H2O+CO2↑ 上式说明,只要维持CO2的浓度处于一个相对恒定的状态,上述反应就会 保持平衡,此时培养基中的OH的浓度也就会相对稳定,换言之,培养基的p 也相对恒定。同时,这也是为什么在培养细胞时要维持一定浓度CO2的重要原 因之 (五)无毒无污染 体外培养的细胞必须生长在无毒无污染的环境中,这时因为体外生长的细胞 一般情况下对有毒有害物质无任何解毒能力,抵抗力也极差。细胞毒性物质的存 在常会导致培养细胞的死亡。 除有毒化学物质的污染危害外,细菌等微生物的污染,以及不同细胞间的交 叉污染也是细胞培养时必须要避免的事情。可通过严格的过滤除菌或灭菌处理, 并使用抗生素来降低污染的发生机率。在细胞培养中最常使用的抗生素是青霉素 (常用浓度是25μg/ml~100μg/ml)与链霉素(25μugml~100ugml)。 不同类型细胞间的交叉污染主要由操作不当引起,在对不同细胞进行操作时 应避免使用同一瓶培养基或使用同一个吸管。 第二节培养细胞的生物学特性 、体外培养细胞的分型 体外培养细胞时,主要有两种培养体系:一种是贴附依赖型,一种是悬浮型, (一)贴附依赖型 大多数培养细胞贴附生长,属于贴壁依赖型细胞,依据培养细胞在体外的形 态大致可将其分为以下四种类型。 1.上皮细胞型细胞多呈扁平不规则多角形,中央有圆形细胞核,细胞彼 此紧密相连成单层膜。生长时呈膜状移动,处于膜边缘的细胞总与膜相连,很少适宜大多数细胞生长的培养基pH多维持在7.0-7.4之间，而细胞在培养过程中 所释放出的代谢产物尤其是CO2会造成培养基pH值的迅速下降，很不利于细胞的 继续生长。为了尽可能长时间的将培养基的pH值稳定在适当范围，常借助CO2 －碳酸氢盐缓冲体系或有机缓冲体系（如HEPES）来解决这一问题。下面的反应 式可以用来说明CO2-碳酸氢盐缓冲体系的作用原理。 NaHCO3 + H2O ←→ Na+ + OH- + H2O+CO2↑ 上式说明，只要维持 CO2 的浓度处于一个相对恒定的状态，上述反应就会 保持平衡，此时培养基中的 OH-的浓度也就会相对稳定，换言之，培养基的 pH 也相对恒定。同时，这也是为什么在培养细胞时要维持一定浓度 CO2 的重要原 因之一。 （五）无毒无污染 体外培养的细胞必须生长在无毒无污染的环境中，这时因为体外生长的细胞 一般情况下对有毒有害物质无任何解毒能力，抵抗力也极差。细胞毒性物质的存 在常会导致培养细胞的死亡。 除有毒化学物质的污染危害外，细菌等微生物的污染，以及不同细胞间的交 叉污染也是细胞培养时必须要避免的事情。可通过严格的过滤除菌或灭菌处理， 并使用抗生素来降低污染的发生机率。在细胞培养中最常使用的抗生素是青霉素 （常用浓度是 25µg/ml ～100µg/ml）与链霉素（25μg/ml ～100μg/ml）。 不同类型细胞间的交叉污染主要由操作不当引起，在对不同细胞进行操作时 应避免使用同一瓶培养基或使用同一个吸管。 第二节 培养细胞的生物学特性 一、体外培养细胞的分型 体外培养细胞时，主要有两种培养体系：一种是贴附依赖型，一种是悬浮型。 （一）贴附依赖型 大多数培养细胞贴附生长，属于贴壁依赖型细胞，依据培养细胞在体外的形 态大致可将其分为以下四种类型。 1．上皮细胞型 细胞多呈扁平不规则多角形，中央有圆形细胞核，细胞彼 此紧密相连成单层膜。生长时呈膜状移动，处于膜边缘的细胞总与膜相连，很少