实验三荧光分光光度法测定维生素B1 一、实验目的 1、学习荧光分光光度法分析的基本原理 2、掌握荧光光度计的使用方法 二、仪器与试剂 1.Y-28荧光分光光度计 2.1.5ug/ml维生素B1标准液(0.1mo1/LHC1配置) 3.碱性铁氰化钾溶液（避光保存）：使用前取1%(w/v)铁氰化钾溶液1ml用 15%(w/v)Na0H稀释至15ml。 4.正丁醇 三、原理 维生素B1(又名硫胺素)在碱性高铁氰化钾溶液中氧化成硫色素，可 用正丁醇提取，硫色素在紫外线照射下，发出蓝色荧光，荧光的强弱与维生素 B1含量成正比，这是维生素B1荧光定量测定的根据。本实验采用标准对照法进 行定量分析。 四、实验步骤 1.按下表配制待测溶液 2.激发光谱扫描：吸取标准溶液的正丁醇上清液于比色池中，固定测量波长，改 变激发光波长，测量荧光强度的变化。以激发光波长为横坐标，荧光强度为纵坐 标作图，即得激发光谱，记录最大激发波长。 3.发射光谱扫描：固定最大激发光波长为其激发波长，测定不同发射波长处的荧 光强度，以荧光波长为横坐标，荧光强度为纵坐标作图，即得发射光谱。记录发 射光波长。 4.各待测溶液荧光强度的测定： 设置荧光测定条件（激发光波长、激发光狭缝10m、发射光波长、发射光狭缝 2m)取各管上层正.丁醇清液依次测定并记录下列荧光强度： a.标准溶液荧光强度Fs 8