实验五大肠杆菌感受态的制备、转化与阳性克隆筛选 1. 教学目标 本次实验先培养大肠杆菌DH5α，制备感受态细胞，转化大肠杆菌，涂布抗性平板进行阳性克隆的筛选。掌握 CC2法转化大肠杆菌的原理，阳性克隆的抗药性筛选方法。了解蓝白斑法筛选等其他阳性克隆子筛选方法。 2.教学重难点 (1)教学重点：大肠杆菌感受态的制备，CaC2转化法，阳性克隆的筛选 (2)教学难点：抗性平板的涂布，注意全程无菌操作。 3.教学内容 (1)过夜培养大肠杆菌： (2)转接后2h制备感受态细胞： (3)连接产物转化感受态细胞： (4)涂布抗性平板，第二天观察阳性克隆，注意全程无菌操作。 4.教学方法： (1)PPT讲解与实地操作： 5.教学评价 (1)观察转化效果，完成实验报告。实验五 大肠杆菌感受态的制备、转化与阳性克隆筛选 1. 教学目标 本次实验先培养大肠杆菌 DH5α，制备感受态细胞，转化大肠杆菌，涂布抗性平板进行阳性克隆的筛选。掌握 CaCl2法转化大肠杆菌的原理，阳性克隆的抗药性筛选方法。了解蓝白斑法筛选等其他阳性克隆子筛选方法。 2.教学重难点 （1）教学重点：大肠杆菌感受态的制备，CaCl2转化法，阳性克隆的筛选 （2）教学难点：抗性平板的涂布，注意全程无菌操作。 3.教学内容 （1）过夜培养大肠杆菌； （2）转接后 2h 制备感受态细胞； （3）连接产物转化感受态细胞； （4）涂布抗性平板，第二天观察阳性克隆，注意全程无菌操作。 4.教学方法： （1）PPT 讲解与实地操作； 5.教学评价 （1）观察转化效果，完成实验报告