3.对照管制作：第5管中加0.5%石炭酸生理盐水0.5ml,第6管加1：25稀释的布氏杆菌病 阳性血清0.5ml,第7管加1：25稀释的布氏杆菌病阴性血清0.5ml 4.加抗原：将布氏杆菌病试管凝集抗原用0.5%石炭酸生理盐水作1：20稀释，每支试管加0.5 ml。 5.感作（反应）：7支试管加完抗原后，充分混匀，置于37℃温箱中4-10h,取出后置室 温18-24h(或37℃温箱12-14h,取出后置室温2-4h:或37℃温箱中22-24h取出)，然后观察并记录 结果。 6。结果判定：判定结果时用”+“表示反应的强度。根据各管中上清液的透明度、抗原被凝集的 程度及凝集块的形状，来判定凝集反应的程度。 十+十十：100%抗原凝集，上清液完全透明，菌体完全被凝集呈伞状沉于管底，振荡时，沉淀 物呈片状、块状或颗粒状。 十+十：75%抗原凝集，上清液略呈混浊，菌体大部分被凝集沉于管底，振荡时情况如上。 (管底凝集物与100%凝集时相同，只是上清液稍浑浊)。 十十：50%抗原凝集，上清液浑浊半透明，管底有中等量的凝集物（管底有明显的凝集）。 十：25%抗原凝集，上清液完全浑浊不透明，管底有少量凝集物或凝集的痕迹。 一：抗原完全未凝集，上清液完全浑浊不透明，但由于菌体的自然下沉，在管底中央出现规则 的菌体自沉圆点，振荡后立即散开呈均匀混浊。 7.判定标准：能使50%抗原凝集的血清最高稀释度称为该血清的凝集价（或称滴度）。 牛、马和骆驼的血清凝集价大于或等于1：100，判为阳性，1：50的凝集价判为疑似反应（可 疑)：猪、绵羊、山羊和狗的血清凝集价大于或等于1：50，判为阳性，1：25的凝集价判为疑似反应 (可疑)。 [注意事项] 1.实验时必须设抗原、阳性血清及阴性血清对照，以避免假阳性、假阴性的结果。 2.结果判为可疑时，隔2-3周后采血重做。阳性畜群，重检时仍为可疑，可判为阳性。对同群 中既无临床症状又无凝集反应阳性者，马、猪重检仍为可疑，判阴性：牛、羊重检仍为可疑者，可 判为阳性，或以补体结合反应核对。 (二)布氏杆菌病平板凝集试验 1.加血清：取洁净玻板一块，用蜡笔划成方格(4cm2)，并注明被检血清号码，以100μL微量 可调加样器按下列量加被检血清于方格内，第1格80uL、第2格40uL、第3格20uL、第4格10如L。血清 用前需放室温，使其温度达20℃左右。每一份检样需换一个ti头。大规模检疫时，允许只用两个血 清量作试验，牛、马、骆驼用40uL和20μL；猪、山羊、绵羊、狗用80μL和40μL。 2。加抗原：每格加布氏杆菌病平板凝集抗原30L,滴在血清附近，而不与血清接触。从血清 量最少的一格起，用牙签将血清与抗原混匀，一份血清用一根牙签。抗原用前摇匀，并置室温使其3. 对照管制作：第5管中加0.5% 石炭酸生理盐水0.5 ml ，第6管加1:25稀释的布氏杆菌病 阳性血清0.5 ml ，第7管加1:25稀释的布氏杆菌病阴性血清0.5 ml 。 4. 加抗原：将布氏杆菌病试管凝集抗原用0.5% 石炭酸生理盐水作1:20稀释，每支试管加0.5 ml 。    5. 感作（反应）：7支试管加完抗原后，充分混匀，置于37℃温箱中4-10h，取出后置室 温18-24h（或37℃温箱12-14h，取出后置室温2-4h；或37℃温箱中22-24 h取出），然后观察并记录 结果。 6. 结果判定：判定结果时用"+"表示反应的强度。根据各管中上清液的透明度、抗原被凝集的 程度及凝集块的形状，来判定凝集反应的程度。 ＋＋＋＋：100％抗原凝集，上清液完全透明，菌体完全被凝集呈伞状沉于管底，振荡时，沉淀 物呈片状、块状或颗粒状。 ＋＋＋：75％抗原凝集，上清液略呈混浊，菌体大部分被凝集沉于管底，振荡时情况如上。 （管底凝集物与100%凝集时相同，只是上清液稍浑浊）。 ＋＋：50％抗原凝集，上清液浑浊半透明，管底有中等量的凝集物（管底有明显的凝集）。 ＋：25％抗原凝集，上清液完全浑浊不透明，管底有少量凝集物或凝集的痕迹。 －：抗原完全未凝集，上清液完全浑浊不透明，但由于菌体的自然下沉，在管底中央出现规则 的菌体自沉圆点，振荡后立即散开呈均匀混浊。 7. 判定标准：能使50% 抗原凝集的血清最高稀释度称为该血清的凝集价（或称滴度）。 牛、马和骆驼的血清凝集价大于或等于1:100，判为阳性，1:50的凝集价判为疑似反应（可 疑）；猪、绵羊、山羊和狗的血清凝集价大于或等于1:50，判为阳性，1:25的凝集价判为疑似反应 （可疑）。 [注意事项] 1. 实验时必须设抗原、阳性血清及阴性血清对照，以避免假阳性、假阴性的结果。 2. 结果判为可疑时，隔2-3周后采血重做。阳性畜群，重检时仍为可疑，可判为阳性。对同群 中既无临床症状又无凝集反应阳性者，马、猪重检仍为可疑，判阴性；牛、羊重检仍为可疑者，可 判为阳性，或以补体结合反应核对。 （二）布氏杆菌病平板凝集试验 1. 加血清：取洁净玻板一块，用蜡笔划成方格（4cm2），并注明被检血清号码，以100mL微量 可调加样器按下列量加被检血清于方格内，第l格80mL、第2格40mL、第3格20mL、第4格10mL。血清 用前需放室温，使其温度达20℃左右。每一份检样需换一个tip头。大规模检疫时，允许只用两个血 清量作试验，牛、马、骆驼用40mL 和20mL ；猪、山羊、绵羊、狗用80mL和40mL。 2. 加抗原：每格加布氏杆菌病平板凝集抗原30mL，滴在血清附近，而不与血清接触。从血清 量最少的一格起，用牙签将血清与抗原混匀，一份血清用一根牙签。抗原用前摇匀，并置室温使其