抗生素 BamH I 抗性基因 HindⅢ SmaI· 质粒 +EcoR I 图1 目的 EcoR I 基因 EcoR I 外源 IMM DNA BamH I Sma I HindlⅢ 图2 (1)若对图中质粒进行改造，插入的SmaI酶切位点越多，质粒的热稳定性 越 (2)用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SmaI切割，原因 是 (3)与只使用EcoR I相比较，使用BamH I和Himd两种限制酶同时处理质粒和 外源DNA的优点在于可以防止 (4)为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入 酶。 (⑤)重组质粒中抗生素抗性基因的作用是 答案(1)高 (2)SmaI会破坏质粒的抗生素抗性基因和外源DNA中的目的基因 (3)质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化 (4)DNA连接 (⑤)鉴别和筛选含有目的基因的细胞 解析：(1)SmaI识别序列中均为GC碱基对，G、C之间含三个氢键，热稳定性 高。(2)据题图可知，SmaI既会破坏标记基因，也会破坏目的基因。(3)若用同种限 制酶切割质粒和外源DNA中的目的基因，因为两端的黏性末端能够互补配对，会 出现自身环化的情况。而用两种不同的限制酶切割，因为两端形成的黏性末端不 能够互补配对，不会出现自身环化的情况。(4)DNA连接酶可以连接末端互补的 DNA片段。（⑤）标记基因可以用于鉴别受体细胞是否含有目的基因。(1)若对图中质粒进行改造,插入的 SmaⅠ酶切位点越多,质粒的热稳定性 越 。 (2)用图中的质粒和外源 DNA 构建重组质粒,不能使用 SmaⅠ切割,原因 是 。 (3)与只使用 EcoRⅠ相比较,使用 BamHⅠ和 HindⅢ两种限制酶同时处理质粒和 外源 DNA 的优点在于可以防止 。 (4)为了获取重组质粒,将切割后的质粒与目的基因片段混合,并加入 酶。 (5)重组质粒中抗生素抗性基因的作用是 。 答案:(1)高 (2)SmaⅠ会破坏质粒的抗生素抗性基因和外源 DNA 中的目的基因 (3)质粒和含目的基因的外源 DNA 片段自身环化 (4)DNA 连接 (5)鉴别和筛选含有目的基因的细胞 解析:(1)SmaⅠ识别序列中均为 G—C 碱基对,G、C 之间含三个氢键,热稳定性 高。(2)据题图可知,SmaⅠ既会破坏标记基因,也会破坏目的基因。(3)若用同种限 制酶切割质粒和外源 DNA 中的目的基因,因为两端的黏性末端能够互补配对,会 出现自身环化的情况。而用两种不同的限制酶切割,因为两端形成的黏性末端不 能够互补配对,不会出现自身环化的情况。(4)DNA 连接酶可以连接末端互补的 DNA 片段。(5)标记基因可以用于鉴别受体细胞是否含有目的基因