(4)解除代谢互锁:赖氨酸与亮氨酸的生物合成之间存在着代谢互锁,应此可以考虑选 育亮氨酸缺陷型,抗亮氨酸结构类似物的突变株。 (三)赖氨酸产生菌FB42的获得 在不含苏氨酸的选择性培养基上得到50株苏氨酸完全缺陷的突变株,在抗性平板上得 到200株Lysⅸx抗性突变株,经初筛、复筛后得到FB41和FB42。同出发菌株FB31相比, FB41和FB42产酸分别提高23%和19%。诱变谱系见图4-2-4 FB3l(Leu、Thr、AEC、AHV)42gL NTG(500ug/ml 30min) FB4l(Leu Thr AEC AHV) 52g/ FB42(Leu Thr AEC AHV LySHx 图4-2-4FB42菌株的诱变谱系 (四)FB42菌株对LyHx和AHV的抗性检验 FB42是在添加AHV和 LysHx的筛选平板上获得,因此具有对AHV和 LysHx的抗性 在LysH为4mgL时,FB42的相对生长仍为80%,而此时FB31几乎不生长;此外FB42 对HV的抗性也有所增加。 (五)FB41和FB42的传代实验 对FB41和FB42进行反复传代,测定其赖氨酸合成能力,结果发现(表4-2-7),FB42 遗传、发酵性能稳定,是一支较好的赖氨酸产生菌,因此进一步对影响FB42产酸的环境因 子和发酵条件进行了研究 表42-7FB41和FB42菌株的传代实验 数 菌株FB41产酸/gL152505149454343 菌株FB42产酸/gL5049514948504850 五、环境因子对FB42分泌赖氨酸的影响 (一)苏氨酸和亮氨酸对产酸的影响 FB42菌株为亮氨酸缺陷型和苏氨酸需求型,所以发酵过程中必须添加苏氨酸和亮氨酸 图4-2-5和4-2-6反映了苏氨酸和亮氨酸对FB42菌株生长和产酸的影响 实验培养基为():葡萄糖100g、硫酸铵35g、尿素2.5g、磷酸氢二钾1g、七水合 硫酸镁0.4g、七水合硫酸铁l0mg、一水合硫酸锰8mg、D-生物素50g、硫胺素200吗g 碳酸钙40g,亮氨酸和苏氨酸的浓度按实验要求定10 (4)解除代谢互锁：赖氨酸与亮氨酸的生物合成之间存在着代谢互锁，应此可以考虑选 育亮氨酸缺陷型，抗亮氨酸结构类似物的突变株。 (三)赖氨酸产生菌 FB42 的获得 在不含苏氨酸的选择性培养基上得到 50 株苏氨酸完全缺陷的突变株，在抗性平板上得 到 200 株 LysHx 抗性突变株，经初筛、复筛后得到 FB41 和 FB42。同出发菌株 FB31 相比， FB41 和 FB42 产酸分别提高 23%和 19%。诱变谱系见图 4-2-4。 FB31(Leu-、Thr-、AECr、AHVr ) 42g/L NTG(500g/ml 30min) FB41(Leu- Thr- AECr AHVr ) 52g/L FB42(Leu- Thr- AECr AHVr LysHxr ) 50g/L 图 4-2-4 FB 42 菌株的诱变谱系 (四)FB42 菌株对 LysHx 和 AHV 的抗性检验 FB42 是在添加 AHV 和 LysHx 的筛选平板上获得，因此具有对 AHV 和 LysHx 的抗性， 在 LysHx 为 4mg/L 时，FB42 的相对生长仍为 80%，而此时 FB31 几乎不生长；此外 FB42 对 HV 的抗性也有所增加。 (五)FB41 和 FB42 的传代实验 对 FB41 和 FB42 进行反复传代，测定其赖氨酸合成能力，结果发现(表 4-2-7)，FB42 遗传、发酵性能稳定，是一支较好的赖氨酸产生菌，因此进一步对影响 FB42 产酸的环境因 子和发酵条件进行了研究。 表 4-2-7 FB41 和 FB42 菌株的传代实验 代数 1 2 3 4 5 6 7 8 菌株 FB41 产酸/ gL -1 52 50 51 49 45 43 43 42 菌株 FB42 产酸/ gL -1 50 49 51 49 48 50 48 50 五、环境因子对 FB42 分泌赖氨酸的影响 (一)苏氨酸和亮氨酸对产酸的影响 FB42 菌株为亮氨酸缺陷型和苏氨酸需求型，所以发酵过程中必须添加苏氨酸和亮氨酸， 图 4-2-5 和 4-2-6 反映了苏氨酸和亮氨酸对 FB42 菌株生长和产酸的影响。 实验培养基为(/L)：葡萄糖 100 g、硫酸铵 35 g、尿素 2.5 g、磷酸氢二钾 1 g、七水合 硫酸镁 0.4 g、七水合硫酸铁 10 mg、一水合硫酸锰 8 mg、D-生物素 50 ug、硫胺素 200 ug、 碳酸钙 40 g，亮氨酸和苏氨酸的浓度按实验要求定