试验鱼人工感染的接种方法目前最常用的有浸泡、口服、注射、涂抹等，究竟选用哪一种方 法最合适，需要根据不同的疾病类型和可能的侵入途径而定。如体表的病，可采用浸泡法： 是体内的病，可采用口服、注射等。接种动物的细菌用量是个问题。接种量过大，即使该菌 为非病原菌，可能会因大量菌体裂解释放的大量内毒素致死动物，并无细菌繁殖致病的过程。 问题的关键是要测定所分离的细菌对接种动物的半数致死量(D50)，根据D50的大 小来判断其致病力的强弱，进而判断其是否为病原菌。这也适用于区分同种细菌不同菌株致 病力的差异。一般的接种剂量为50LD50。 本实验采用注射的方法。实验鱼在实验前需进行1~2周的暂养，每组实验用鲫鱼10尾， 每尾肌肉或腹腔接种0.1~0.5ml稀释后的肉汤培养物，置盛有水的水族箱内，用控 温仪使温度维持在8~30℃左右。定时投饵和换水，同时设接种无菌生理盐水的对照 组。 4,观察记录 观察接毒卿鱼的发病症状及死亡情况，并做好记录。 5,细菌分离 对颜临死亡或刚死不久的鲫鱼进行病原菌的分离。 鱼体表：取病灶部分小片或用接种环刮取病灶部位，接种于普通肉汤培养基增菌或直接在 普通琼脂平板（鲜血）上划线分离。 内部组织器官：用T0%酒精浸过的纱布覆盖体表或用酒精棉球擦拭，进行体表消毒，无 菌打开病鱼的腹腔，以肝、肠、心脏等脏器为材料，用剪刀在火焰上烧灼灭菌，再在组织上 烫之，杀死表面的杂菌，随即在烧灼部刺一小孔。用灭菌的接种环（待冷2一5秒），伸 向烧灼部小洞中，用手指将接种环轻轻旋转两次，借以达到取足材料的目的。左手持握普通 (鲜血)琼脂平板（平皿盖留在桌上），使之尽量垂直，以免空气中杂菌落入，并靠近火焰 右手持带有细菌材料的接种环在穷汉字平板上分区划线。划线时接种环面与平板表面成 30~40度的角轻轻接触，在平板表面轻快地移动，接种环不应嵌入培养基内，且不要重 复，否则形成菌苔。划线完毕，盖上皿盖，接种环灭菌后放下，并在平皿底部用记号笔注明试验鱼人工感染的接种方法目前最常用的有浸泡、口服、注射、涂抹等，究竟选用哪一种方 法最合适，需要根据不同的疾病类型和可能的侵入途径而定。如体表的病，可采用浸泡法： 是体内的病，可采用口服、注射等。接种动物的细菌用量是个问题。接种量过大，即使该菌 为非病原菌，可能会因大量菌体裂解释放的大量内毒素致死动物，并无细菌繁殖致病的过程。 问题的关键是要测定所分离的细菌对接种动物的半数致死量（ LD 50 ），根据 LD 50 的大 小来判断其致病力的强弱，进而判断其是否为病原菌。这也适用于区分同种细菌不同菌株致 病力的差异。一般的接种剂量为 50LD 50 。 本实验采用注射的方法。实验鱼在实验前需进行 1 ～ 2 周的暂养。每组实验用鲫鱼 10 尾， 每尾肌肉或腹腔接种 0 . 1 ～ 0 . 5ml 稀释后的肉汤培养物，置盛有水的水族箱内，用控 温仪使温度维持在 28 ～ 30 ℃ 左右。定时投饵和换水，同时设接种无菌生理盐水的对照 组。 4 ．观察记录 观察接毒鲫鱼的发病症状及死亡情况，并做好记录。 5 ．细菌分离 对濒临死亡或刚死不久的鲫鱼进行病原菌的分离。 鱼体表： 取病灶部分小片或用接种环刮取病灶部位，接种于普通肉汤培养基增菌或直接在 普通琼脂平板（鲜血）上划线分离。 内部组织器官： 用 70 ％酒精浸过的纱布覆盖体表或用酒精棉球擦拭，进行体表消毒，无 菌打开病鱼的腹腔，以肝、肠、心脏等脏器为材料，用剪刀在火焰上烧灼灭菌，再在组织上 烫之，杀死表面的杂菌，随即在烧灼部刺一小孔。用灭菌的接种环（待冷 2 ～ 5 秒），伸 向烧灼部小洞中，用手指将接种环轻轻旋转两次，借以达到取足材料的目的。左手持握普通 （鲜血）琼脂平板（平皿盖留在桌上），使之尽量垂直，以免空气中杂菌落入，并靠近火焰， 右手持带有细菌材料的接种环在穷汉字平板上分区划线。划线时接种环面与平板表面成 30 ～ 40 度的角轻轻接触，在平板表面轻快地移动，接种环不应嵌入培养基内，且不要重 复，否则形成菌苔。划线完毕，盖上皿盖，接种环灭菌后放下，并在平皿底部用记号笔注明