A純化階段 B分析方法 酶分离纯化不同阶段 Material Background knowledge about Mat erial 酶的纯化过程,约可分为 Extraction Protein/ Adivity assay 三个阶段: Protein (1)粗蛋白质( crude Electrophoresis fractionation Native-PAGE protein):采样→均质 Ampniumsulate SDS-PAGE okrent Gradient PAGe 打破细胞→抽出全蛋白 多使用盐析沉淀法;可以 Chromatography Kinetic study Mol ecular weight Sedimentation coeffi cent 粗略去除蛋白质以外的物 determinati on 州 finity chomatography 质 FPLC Quaternary structure 月. ElectrophoresIs Isoelectric focusing Pepti de mapping (2)部分纯化 (partially purified): Amino acid analysis 初步的纯化,使用各钟柱 Pure enzyme Amino acid sequencing Extinct on coefficient 层析法。 Antibody production iMmunoassays: (3)均质酶 Monocbral or conrentional antibodies Immunoblotting 2 ELISA ( homogeneous):目标酶 X-Ray Double diffusion Crystal 的进一步精制纯化,可用 crystallography Irmmunoeledropharesis 制备式电泳或HPLC Spectroscopic methods CD, ORD, NMR& ESR酶的纯化过程，约可分为 三个阶段： (1) 粗蛋白质 (crude protein): 采样 → 均 质 打破细胞 → 抽出全蛋白， 多使用 盐 析沉淀 法；可以 粗略去除蛋白质以外的物 质。 (2) 部分纯化 (partially purified): 初步的纯化，使用各钟 柱 层析法 。 (3) 均质酶 (homogeneous): 目标酶 的进一步精制纯化，可用 制备 式电泳 或 HPLC 。 酶分离纯化不同阶段 本章 目录