维普资讯htp/www.cqvip.com 432· 东北农业大学学报 第34卷 过夜,计数应少于5个菌落者,作为该药物的最低杀培养12h后,取50μ菌液接种于10mL的蛋白胨 菌浓度(MBC)。相同过程重复5次 水中,培养10h,使细菌在10-CFU·mL-1,即为 1.2.2MBC/MIC的值分别用各药对嗜水气单对数生长期菌悬液 胞菌的MBC值除以相应的MIC值,其商即为二者1.2.5抗菌药的杀菌动力学曲线取0.10mL 的比率。将其作为评价这几种药物抗菌效力的参数200×MIC或(500XMIC、800×MC)抗菌药液加 入8.90mL30℃预温的蛋白胨水中,将对数生长期 1.23细菌计数以0.85%无菌生理盐水作为细细菌原液用生理盐水稀释10-后取1mL加入到已 菌计数的稀释液,对菌液进行10~10倍系列稀释加抗菌药的蛋白胨水中。立即置于30℃恒温培养箱 后,取010mL置于普通琼脂平板上,每个稀释度3中培养,然后分别于0,0.5,1,1.5,2,3,4,5,6, 只平板,30℃过夜培养后,对菌数在30~300之间的8,12h取0.10mL菌液进行细菌计数。重复3次 平板进行菌落计数,取其平均值,单位为CFU 取其平均值。每次实验做一个不加任何抗菌药的对 照并于0,0.5,1,1.5,2,3,4h取0.10mL菌液 1.2.4嗜水气单胞菌生长曲线及对数期茵悬液的进行细菌计数。 制作于生长有嗜水气单细胞的琼脂平板上挑取1 个菌落,接种于10m30预温的蛋白胨水中,置2结果 30℃恒温培养箱中培养12h后,取50μ菌液接种2.1盐酸环丙沙星、乳酸环丙沙星、恩诺沙星、单诺 于10mL预温的蛋白胨水中培养,然后分别于0,沙星、二氟沙星对嗜水气单胞菌的体外抑、杀菌作 5,0.5,1,2,3,4,6,8,10h取0.1mL菌液用。 进行细菌计数,重复3次,取其平均值。将细菌计数 结果见表1。这几种氟喹诺酮类药物对嗜水气 所得各时间点CPU·mL值取常用对数,以其为单胞菌均有较好的抑菌杀菌活性,但在这几种药物 纵轴,以孵育时间(h)为横轴,建立细菌生长曲线。当中,盐酸环丙沙星和乳酸环丙沙星的药效表现尤 根据细菌生长曲线的结果,制作对数生长期细菌。由为突出,他们对嗜水气单胞菌的MIC都为0.006 平板挑取单个菌落接种于10mL蛋白胨水中,30℃wg·mg1,MBC都为0.025wg·mL 表1几种氟喳诺酮类药物对嗜水气单胞菌的MIC、MBC(g·mL-") Table 1 The MIC and MBC of different fluoquinolone on A hydrophila 盐酸环丙沙星 乳酸环丙沙星 恩诺沙星 单诺沙星 氟沙星 药物名称 Criprofloxoan Enrofloxacin Difloxacin hydrochlorid MIC MBC MBC MIC MBC MIC MIC MIC 嘈水气单胞菌 0.006250.0250.006250.025 0.0125 0.050.1 MBC/MIC的值 2 2.2嘻水气单胞菌的生长曲线 2.3盐酸环丙沙星、乳酸环丙沙星、恩诺沙星、单诺 嗜水气单胞菌经过预培养接种至新鲜的培养基沙星、二氟沙星对嗜水气单胞菌的杀菌曲线 中的生长情况见图1,由图1可见嗜水气单胞菌经 盐酸环丙沙星、乳酸环丙沙星、恩诺沙星、单诺 过预培养接种至新鲜的培养基中一般经过2h后进沙星、二氟沙星分别以2,5,8MIC浓度对浊度为 入对数生长期,对数生长期一般持续6h,即该菌在105-CFU·mL-的嗜水气单胞菌的杀菌曲线(见 蛋白陈水中生长8h以后进入对数生长末期,培养图2~5)。所有药的2MIC浓度对浊度为10-1 10h后的细菌的浊度达到10CFU·m后,生cFU·mL-的嗜水气单胞菌的7h以内是随时间 长速度减慢并逐渐趋于恒定在对数生长期中,嗜水的增加菌数减少,7h以后活菌数开始增加。恩诺沙 气单胞菌在蛋白胨水中进入对数生长期后,增加 星和单诺沙星的5MIC和8MIC在12h时在培养 个1gCFU·mL1)单位需时间是1.829±0.0557基中巳无活菌存在。二氟沙星的5MIC和8MIC在 9h时在培养基中已无活菌存在。嗜水气单胞菌暴东 北 农 业 大 学 学 报 第 34卷 过 夜 ，计 数 应 少 于 5个 菌 落 者 ，作 为 该 药物 的 最 低 杀 菌 浓 度 (MBC)。 相 同过 程 重 复 5次 。 1．2．2 MBC／MIC 的值 分 别 用各 药 对 嗜水气 单 胞 菌 的 MBC值 除 以 相 应 的 MIC值 ，其 商 即 为 二 者 的 比 率 。将 其 作 为评 价 这 几 种 药 物 抗 菌 效 力 的 参 数 之 一 。 1．2．3 细 菌计 数 以 0．85 无 菌 生 理 盐 水 作 为 细 菌 计 数 的 稀 释 液 ，对 菌 液 进 行 10～ 10 倍 系 列 稀 释 后 ，取 0．10mL置 于 普 通 琼 脂 平 板 上 ，每 个 稀 释 度 3 只平板 ，30℃过夜培 养后 ，对菌 数在 30~300之 间的 平 板 进 行 菌 落 计 数 ，取 其 平 均 值 ，单 位 为 CFU · mL_。。 1．2．4 嗜 水 气 单 胞 菌生 长 曲 线 及 对 数 期 菌悬 液 的 制作 于 生 长 有 嗜 水 气 单 细 胞 的琼 脂 平 板 上 挑 取 1 个 菌 落 ，接 种 于 10mL30℃预 温 的 蛋 白 胨 水 中 ，置 30~C恒 温 培 养 箱 中培 养 12h后 ，取 50 菌 液 接 种 于 10mL 预 温 的 蛋 白胨 水 中 培 养 ，然 后 分 别 于 0， 0．25，0．5，1，2，3，4，6，8，10h取 0．1mL 菌 液 进行 细菌计数 ，重复 3次 ，取其平均值 。将细菌计数 所 得 各 时 间点 CPU ·mL-1值 取常 用 对数 ，以 其为 纵 轴 ，以孵育 时 间 (h)为 横 轴 ，建立 细 菌 生长 曲线。 根 据 细 菌 生 长 曲线 的 结 果 ，制 作 对 数 生 长 期 细 菌 。由 培 养 12h后 ，取 50uL菌 液 接 种 于 10mL的 蛋 白胨 水 中 ，培 养 10h，使 细 菌 在 10卜 CFU ·mL_。，即 为 对 数 生 长 期 菌 悬 液 。 1．2．5 抗 菌 药 的 杀 菌 动 力 学 曲 线 取 0．10mL 200×MIC 或 (500× MIC、800× MIC)抗 菌 药 液 加 入 8．90mL 30~C预 温 的 蛋 白胨 水 中 ，将 对 数 生 长 期 细 菌 原 液 用 生 理 盐 水 稀 释 10-1后 取 1mL 加 入到 已 加抗菌药 的蛋白胨水 中。立 即置于 30℃恒温培 养箱 中 培 养 ，然 后 分 别 于 0，0．5，1，1．5，2，3，4，5，6， 8，12h取 0．10mL菌 液 进 行 细 菌 计 数 。重 复 3次 ， 取 其 平 均 值 。 每 次 实 验 做 一 个 不 加 任 何 抗 菌 药 的 对 照 并 于 0，0．5，1，1．5，2，3，4h取 0．10mL 菌 液 进 行 细 菌计 数 。 2 结 果 2．I 盐酸环丙 沙星、乳酸环 丙沙星 、恩诺沙星 、单诺 沙 星 、二 氟沙 星对 嗜水 气单 胞 菌 的体 外 抑 、杀菌 作 用 。 结 果见表 1。这几种 氟喹诺 酮类药物 对 嗜水气 单胞 菌均 有较好 的抑 菌杀 菌活性 ，但在这 几种 药物 当中 ，盐 酸环 丙沙 星和乳酸 环丙 沙 星的药 效表 现 尤 为 突 出 ，他 们 对 嗜 水 气 单 胞 菌 的 MIC 都 为 0．00625 平板挑取 单个菌落 接种于 10mL蛋白胨水 中 ，30~C ug·mg_。，MBC都为 0．025lag‘mL_。。 表 1 几 种 氟喳 诺酮 类药 物对 嗜水 气单 胞 菌 的 MIC、MBC(~ ·mL-1) Table 1 The M IC and M BC ofdifferentflupquinoloneonA ．hydrophila 2．2 嗜 水 气 单 胞 菌 的生 长 曲 线 嗜 水 气 单 胞 菌 经 过 预 培 养 接 种 至 新 鲜 的 培 养 基 中的 生 长情 况见 图 1，由图 1可 见嗜 水气单 胞 菌经 过 预培养接 种至新 鲜的培 养基 中一般 经过 2h后进 入 对 数 生 长 期 ，对 数 生 长 期 一 般 持 续 6h，即 该 菌 在 蛋 白 胨 水 中 生 长 8h以 后 进 入 对 数 生 长 末 期 ，培 养 10h后 的 细 菌 的 浊 度 达 到 10 CFU ·mL 后 ，生 长速度减慢 并逐渐趋于恒 定 。在对 数生长期 中，嗜水 气 单 胞 菌 在 蛋 白 胨 水 中 进 入 对 数 生 长 期 后 ，增 加 一 个 1g(CFU ·mL )单 位 需 时 间是 1．829± 0．0557 h。 2．3 盐酸环丙 沙星、乳酸环 丙沙星 、恩诺沙 星 、单诺 沙星 、二氟沙星 对嗜水气单胞 菌的杀菌 曲线 盐 酸 环丙 沙星、乳酸 环丙 沙星 、恩 诺沙 星 、单 诺 沙 星 、二 氟 沙 星 分 别 以 2，5，8M IC浓 度 对 浊 度 为 10 CFU ·mL-1的 嗜 水 气 单 胞 菌 的 杀 菌 曲 线 (见 图 2～ 5)。所 有 药 的 2MIC 浓 度 对 浊 度 为 10 CFU ·mL-1的嗜水 气 单胞 菌 的 7h以 内是 随时 间 的增加菌数 减少 ，7h以后活菌数开始增 加 。恩诺沙 星 和 单 诺 沙 星 的 5MIC和 8MIC在 12h时 在 培 养 基 中 已无 活 菌 存 在 。二 氟 沙 星 的 5MIC 和 8MIC 在 9h时 在 培 养 基 中 已无 活 菌 存 在 。 嗜 水气 单 胞 菌 暴 维普资讯 http://www.cqvip.com