实验十三蛋白质的两性性质及等电点的测定 一、目的 通过实验了解蛋白质的两性性质及等电点与蛋白质分子聚沉的关系。掌捉通 过聚沉测定蛋白质等电点的方法。 二、原理 蛋白质是两性电解质。蛋白质分子中可以解离的基团除N端α-氨基与C端 羧基外，还有肽链上某些氨基酸残基的侧链基团，如酚基、巯基、腻基、咪唑基 等基团，它们都能解离为带电基团。因此，在蛋白质溶液中存在着下列平衡： COOH NH2 蛋白质分子 c- COOH H +0H NH +OH P NH 阴离子 两性离子 阳离子 pH>pl pH=pI pH<P 电场中：移向阳极 不移动 移向阴极 调节溶液的出使蛋白质分子的酸性解离与碱性解离相等，即所带正负电荷相 等，净电荷为零，此时溶液的pH值称为蛋白质的等电点。在等电点时，蛋白质溶 解度最小，溶液的混浊度最大，配制不同H的缓冲液，观察蛋白质在这些缓冲液 中的溶解情况即可确定蛋白质的等电点。 三、仪器和试剂 1.仪器 (1)试管架 (2)试管：15ml×6 (3)刻度吸管：lml×4,2ml×4,10ml×2 (4)胶头吸管× 2.试剂 (1)1m0l/L乙酸 (2)0.1mol/L乙酸 (3)0.01mol/L乙酸 (4)0.2mol/LNaOH (5)0.2mol/L盐酸 (6)0.01%溴甲酚兰绿指示剂 (7)0.5%酪蛋白 实验十三 蛋白质的两性性质及等电点的测定 一、目的 通过实验了解蛋白质的两性性质及等电点与蛋白质分子聚沉的关系。掌握通 过聚沉测定蛋白质等电点的方法。 二、原理 蛋白质是两性电解质。蛋白质分子中可以解离的基团除 N-端α-氨基与 C-端α -羧基外，还有肽链上某些氨基酸残基的侧链基团，如酚基、巯基、胍基、咪唑基 等基团，它们都能解离为带电基团。因此，在蛋白质溶液中存在着下列平衡： 调节溶液的 pH 使蛋白质分子的酸性解离与碱性解离相等，即所带正负电荷相 等，净电荷为零，此时溶液的 pH 值称为蛋白质的等电点。在等电点时，蛋白质溶 解度最小，溶液的混浊度最大，配制不同 pH 的缓冲液，观察蛋白质在这些缓冲液 中的溶解情况即可确定蛋白质的等电点。 三、仪器和试剂 1．仪器 （1）试管架 （2）试管：15ml × 6 （3）刻度吸管：lml×4，2mI×4，10ml×2 （4）胶头吸管×2 2. 试剂 （1）1 mol／L 乙酸 （2）0.1 mol／L 乙酸 （3）0.01 mol／L 乙酸 （4）0.2 mol／L NaOH （5）0.2 mol／L 盐酸 （6）0.01％ 溴甲酚兰绿指示剂 （7）0.5％酪蛋白