基因芯片技术 16307130150张云哲 、简介 基因芯片是生物芯片的一种,他的的原型是80年代中期提出的。基因芯片 的测序原理是杂交测序方法即通过与一组已知序列的核酸探针杂交进行核酸序 列测定的方法,在一块基片表面固定了序列已知的靶核苷酸的探针。当溶液中带 有荧光标记的核酸序列 TATGCAATCTAG,与基因芯片上对应位置的核酸探针产 生互补匹配时,通过确定荧光强度最强的探针位置,获得·组序列完全互补的探 针序列。据此可重组出靶核酸的序列 二、技术原理 1)理论支持 DNA根据碱基配对原则,在常温下和中性条件下形成双链DNA分子,但在 高温、碱性或有机溶剂等条件下,双螺旋之间的氢键断裂,双螺旋解开,形成单 链分子。当消除变性条件后,变性DNA两条互补链可以重新结合,恢复原来的 双螺旋结构,这一过程称为复性。复性后的DNA,其理化性质能得到恢复。 所以,我们根据这个原理,制作DNA探针。利用分子杂交这一特性,先将 杂交链中的一条用某种可以检测的方式进行标记,再与另一种核酸(待测样本) 进行分子杂交,然后对待测核酸序列进行定性或定量检测,分析待测样本中是否 存在该基因或该基因的表达有无变化。基因芯片通常采用反向杂交方法,即将多 个探针分子点在芯片上,样本的核酸靶标进行标记后与芯片进行杂交。 DNA探针 待测DNA 3 杂交 2)工作步骤 1、DNA探针的大量收集和纯化,基因芯片探针制备方法可以是根据基因 设计特异性的PCR引物,对基因进行特异性地扩张,也可以是建立均一化的 CDNA文库,通过克隆鉴定、筛选、扩增产生。 2、将纯化后的探针固定在片基上,首先要将基片迸行特殊的化学处理,使 玻璃片醛基化或氨基化,然后将纯化的探针通过显微打印或喷打在基片上,再 将打印好的玻璃片进行后处理。 3、样品的标记,标记的方法般是采用逆转录法或随机引物延伸法等。基因芯片技术 ——16307130150 张云哲 一、简介 基因芯片是生物芯片的一种，他的的原型是 80 年代中期提出的。基因芯片 的测序原理是杂交测序方法，即通过与一组已知序列的核酸探针杂交进行核酸序 列测定的方法，在一块基片表面固定了序列已知的靶核苷酸的探针。当溶液中带 有荧光标记的核酸序列 TATGCAATCTAG，与基因芯片上对应位置的核酸探针产 生互补匹配时，通过确定荧光强度最强的探针位置，获得一组序列完全互补的探 针序列。据此可重组出靶核酸的序列。 二、技术原理 1）理论支持 DNA 根据碱基配对原则，在常温下和中性条件下形成双链 DNA 分子，但在 高温、碱性或有机溶剂等条件下，双螺旋之间的氢键断裂，双螺旋解开，形成单 链分子。当消除变性条件后，变性 DNA 两条互补链可以重新结合，恢复原来的 双螺旋结构，这一过程称为复性。复性后的 DNA，其理化性质能得到恢复。 所以，我们根据这个原理，制作 DNA 探针。利用分子杂交这一特性，先将 杂交链中的一条用某种可以检测的方式进行标记，再与另一种核酸（待测样本） 进行分子杂交，然后对待测核酸序列进行定性或定量检测，分析待测样本中是否 存在该基因或该基因的表达有无变化。基因芯片通常采用反向杂交方法，即将多 个探针分子点在芯片上，样本的核酸靶标进行标记后与芯片进行杂交。 2）工作步骤 1、DNA 探针的大量收集和纯化，基因芯片探针制备方法可以是根据基因 设计特异性的 PCR 引物，对基因进行特异性地扩张，也可以是建立均一化的 cDNA 文库，通过克隆鉴定、筛选、扩增产生。 2、将纯化后的探针固定在片基上，首先要将基片进行特殊的化学处理，使 玻璃片醛基化或氨基化，然后将纯化的探针通过显微打印或喷打在基片上，再 将打印好的玻璃片进行后处理。 3、样品的标记，标记的方法一般是采用逆转录法或随机引物延伸法等