可溶性抗原（如细菌浸出液、含菌病料浸出液、病毒、血清以及其他来源的蛋白质、多糖、类脂 等)与其相应的抗体结合后，在电解质参与下，形成肉眼可见的白色沉淀，称为沉淀反应 (Precipitation reaction)。沉淀反应中的抗原称为沉淀原(Precipitinogen),抗体称为沉淀素 (Precipitin)。 沉淀反应主要包括有琼脂扩散沉淀试验及免疫电泳等。 [目的要求] 1,掌握琼脂扩散沉淀试验的原理和操作方法。 2.了解对流免疫电泳的一般原理和操作技术。 [材料与试剂] 1.口径0.4cm的小试管，毛细滴管，载玻片，平皿，烧杯没，打孔器，针头，酒精灯，加样器 (移液器)，滴头，电泳槽，电泳仪等。 2.生理盐水，8.5%NaC1溶液，0.5%石炭酸生理盐水，巴比妥缓冲液，琼脂粉等 3.禽流感琼扩抗原，禽流感阳性血清，待检鸡血清：兔抗猪1gG,猪血清，鸡血清，兔血清、 牛血清，羊血清等。 4.小鹅瘟琼扩抗原，小鹅瘟抗血清：鸡传染性法氏囊病琼扩抗原（或待检法氏囊组织浸提 液)，鸡传染性法氏囊病阳性血清。 [实验内容及操作方法] (一)琼脂扩散沉淀试验 琼脂扩散沉淀试验(Agar gel precipitation test,AGPT)是沉淀反应的一种形式。物质自由 运动形成扩散现象，扩散可以在各种介质中进行。1%琼脂凝胶形成网状构架，空隙中是 98%-99%的水，允许分子量在200ku以下分子通过。绝大多数可溶性抗原和抗体的分子量在200ku以 下，因此可以在琼脂凝胶中自由扩散，所受阻力甚小。二者在琼脂凝胶中相遇，在最适比例处结合 成复合物，此复合物因颗粒较大而不能扩散，故形成沉淀带。 本试验可用已知抗体检测样品中的抗原，也可用已知抗原检测血清样品中的抗体。 1.琼脂板制备：称取1g琼脂粉，加入100ml生理盐水或8.5%NaC1溶液（禽类），煮沸使之 溶解。待溶解的琼脂温度降至60℃左右时倒入平皿中，厚度为2-3mm。 2.打孔：用打孔器在琼脂凝胶板上按7孔梅花图案打孔，孔径约3-5mm,中心孔和周围孔间的 距离约为3-5m。挑出孔内琼脂凝胶，注意不要挑破孔的边缘。 3.封底：在火焰上缓缓加热，使孔底琼脂凝胶微微融化，以防止孔底边缘渗漏。 4.加样：以毛细滴管（或加样器）将样品加入孔内，注意不要产生气泡，以加满为度。 (1)血清流行病学调查：将禽流感琼扩抗原置中心孔，周围1、3、5孔加禽流感阳性血清，2、 4、6孔分别加待检鸡血清，每加一个样品应换一个滴头。可溶性抗原(如细菌浸出液、含菌病料浸出液、病毒、血清以及其他来源的蛋白质、多糖、类脂 等)与其相应的抗体结合后，在电解质参与下，形成肉眼可见的白色沉淀，称为沉淀反应 (Precipitation reaction)。 沉淀反应中的抗原称为沉淀原（Precipitinogen），抗体称为沉淀素 （Precipitin）。 沉淀反应主要包括有琼脂扩散沉淀试验及免疫电泳等。 [目的要求] 1. 掌握琼脂扩散沉淀试验的原理和操作方法。 2. 了解对流免疫电泳的—般原理和操作技术。 [材料与试剂] 1. 口径0.4cm的小试管，毛细滴管，载玻片，平皿，烧杯没，打孔器，针头，酒精灯，加样器 （移液器），滴头，电泳槽，电泳仪等。 2. 生理盐水，8.5% NaCl溶液，0.5% 石炭酸生理盐水，巴比妥缓冲液，琼脂粉等。 3. 禽流感琼扩抗原，禽流感阳性血清，待检鸡血清；兔抗猪IgG，猪血清，鸡血清，兔血清、 牛血清，羊血清等。 4. 小鹅瘟琼扩抗原，小鹅瘟抗血清；鸡传染性法氏囊病琼扩抗原（或待检法氏囊组织浸提 液），鸡传染性法氏囊病阳性血清。 [实验内容及操作方法] （一）琼脂扩散沉淀试验 琼脂扩散沉淀试验（Agar gel precipitation test，AGPT）是沉淀反应的一种形式。物质自由 运动形成扩散现象，扩散可以在各种介质中进行。1% 琼脂凝胶形成网状构架，空隙中是 98%-99% 的水，允许分子量在200ku以下分子通过。绝大多数可溶性抗原和抗体的分子量在200ku以 下，因此可以在琼脂凝胶中自由扩散，所受阻力甚小。二者在琼脂凝胶中相遇，在最适比例处结合 成复合物，此复合物因颗粒较大而不能扩散，故形成沉淀带。 本试验可用已知抗体检测样品中的抗原，也可用已知抗原检测血清样品中的抗体。 1. 琼脂板制备：称取1g琼脂粉，加入100ml 生理盐水或8.5% NaCl溶液（禽类），煮沸使之 溶解。待溶解的琼脂温度降至60℃左右时倒入平皿中，厚度为2-3mm。 2. 打孔：用打孔器在琼脂凝胶板上按7孔梅花图案打孔，孔径约3-5mm，中心孔和周围孔间的 距离约为3-5mm。挑出孔内琼脂凝胶，注意不要挑破孔的边缘。 3. 封底：在火焰上缓缓加热，使孔底琼脂凝胶微微融化，以防止孔底边缘渗漏。 4. 加样：以毛细滴管（或加样器）将样品加入孔内，注意不要产生气泡，以加满为度。 （1）血清流行病学调查：将禽流感琼扩抗原置中心孔，周围1、3、5孔加禽流感阳性血清，2、 4、6孔分别加待检鸡血清，每加一个样品应换一个滴头