的乙醇后,再加入120m185%的磷酸,用水稀释至1升 2.器材 (1)可见光分光光度计 (2)旋涡混合器 (3)试管16支 (三)操作方法 1.标准方法 (1)取16支试管,1支作空白,3支留作未知样品,其余试管分为两组按表中顺序 分别加入样品、水和试剂,即用10mg/ml的标准蛋白质溶液给各试管分别加入:0、0.01、 0.02、0.04、006、0.08、0.1m,然后用无离子水补充到0.lm。最后各试管中分别加入 50ml考马斯亮兰G-250试剂,每加完一管,立即在旋涡混合器上混合(注意不要太剧 烈,以免产生大量气泡而难于消除)。未知样品的加样量见下表中的第8、9、10管。 (2)加完试剂2~5分钟后,即可开始用比色皿,在分光光度计上测定各样品在595nm 处的光吸收值A595,空白对照为第1号试管,即0.1mlHO加50mlG-250试剂 注意:不可使用石英比色皿(因不易洗去染色),可用塑料或玻璃比色皿,使用后 立即用少量95%的乙醇荡洗,以洗去染色。塑料比色皿决不可用乙醇或丙酮长时间浸泡。 考马斯亮兰法实验表格: 管号123 标准蛋白质00.010.020.040.060080.10 (1.Omg/ml) 未知蛋白质 0.020.040.06 (约10mg/m) 蒸馏水 0.10.090.080.060.040.0200.080.060.04 考马斯亮蓝 G-250试剂505.05.05.0505.05.0505.050 每管中的蛋 白质量(μg) 光吸收值 (A595) (3)用标准蛋白质量(μg)为横座标,用吸光度值Ass为纵座标,作图,即得到 条标准曲线。由此标准曲线,根据测出的未知样品的A59s值,即可查出未知样品的蛋 白质含量。177 的乙醇后，再加入 120ml 85%的磷酸，用水稀释至 1 升。 2. 器材： （1）可见光分光光度计 （2）旋涡混合器 （3）试管 16 支 （三）操作方法 1. 标准方法 （1）取 16 支试管，1 支作空白，3 支留作未知样品，其余试管分为两组按表中顺序， 分别加入样品、水和试剂，即用 1.0mg/ml 的标准蛋白质溶液给各试管分别加入：0、0.01、 0.02、0.04、0.06、0.08、0.1ml，然后用无离子水补充到 0.1ml。最后各试管中分别加入 5.0ml 考马斯亮兰 G—250 试剂，每加完一管，立即在旋涡混合器上混合（注意不要太剧 烈，以免产生大量气泡而难于消除）。未知样品的加样量见下表中的第 8、9、10 管。 （2）加完试剂 2~5 分钟后，即可开始用比色皿，在分光光度计上测定各样品在 595nm 处的光吸收值 A595，空白对照为第 1 号试管，即 0.1mlH2O 加 5.0mlG—250 试剂。 注意：不可使用石英比色皿（因不易洗去染色），可用塑料或玻璃比色皿，使用后 立即用少量 95%的乙醇荡洗，以洗去染色。塑料比色皿决不可用乙醇或丙酮长时间浸泡。 考马斯亮兰法实验表格： 管 号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 标准蛋白质 0 0.01 0.02 0.04 0.06 0.08 0.10 (1.0mg/ml) 未知蛋白质 0.02 0.04 0.06 (约 1.0mg/ml) 蒸馏水 0.1 0.09 0.08 0.06 0.04 0.02 0 0.08 0.06 0.04 考马斯亮蓝 G－250 试剂 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 每管中的蛋 白质量（g） 光吸收值 （A595） （3）用标准蛋白质量（g）为横座标，用吸光度值 A595 为纵座标，作图，即得到 一条标准曲线。由此标准曲线，根据测出的未知样品的 A595 值，即可查出未知样品的蛋 白质含量