后又用高锰酸钾溶液泡种子15分钟,为种子消毒,将种子从高猛酸钾溶液中捞出, 种眼朝下放在早已经准备好的有土的孔中。按时浇水,保持温度和适时光照,使其 发芽。 然后移栽,进一步得到有真叶的植株,并设置酸碱梯度为pH=5、6.5、8,每个 梯度30个,每个pH设置10个平行样。 2)不同时间段蚕豆植株表观形态变化的测定: 在植株生长的时期定时测量植株表观形态变化,包括高度,色泽,健康程度等指标 3)不同时间段蚕豆植株根系活力的测定 (1)定性观察 将洗净的植株根系浸入盛有25ug/ml的a-萘胺溶液的容器中,容器外用黑纸包裹, 静置24——36小时候观察水稻根系的着色状况。着色深者,其根系活力较着色潜者大 (2)定量测定: aa-萘胺含量的测定:称取12g洗净的根系放在100m三角烧瓶中。然后加50ug/ml 的a-萘胺溶液与pH=7.0磷酸缓冲液等量混合液5σm,轻轻振荡,静置1mi,吸取2ml 测定a萘胺的含量,作为实验开始时的数据 b.a-萘胺含量的测定:吸取2ml待测液,加入10m蒸馏水,再在其中加入1%对 氨基苯磺酸1m和亚硝酸钠溶液1m,再用蒸馏水定容到25m。在20-60min内510nm 处比色,读取o.D值,在标准曲线上查得相应的a-萘胺含量。从实验开始10min时的 数据减去自动氧化的数值,即为溶液中所有的a-萘胺量以ug/(gh)表示。还应将根系 烘干称其干重。 c绘制a-萘胺标准曲线:取50ug/m的a-萘胺溶液,配制成50、45、40、35、30、 25、20、15、10、5ug/m的系列溶液,以o.D值为纵坐标,a-萘胺含量为横坐标,绘 制标准曲线 4)不同时间段蚕豆植株硝酸还原酶的测定(以离体法为例): (1)酶的提取: 称取0.5g洗净的材料放于研钵中,冷冻30min。然后加入适量石英砂和提取液2ml 磨成匀浆。匀浆用二层纱布过滤,在0-4度,4000r/min冷冻离心20min,得到的上清 液即为酶的粗提液。 (2)亚硝酸根含量测定:吸取酶的粗提液0.2m于一试管中,加入0.5ml硝酸钾溶液, 0.3mNAD,混合后在25度保温30min。保温结束后立即加入磺胺试剂2m及a萘胺试 剂2m1,混合摇匀,用分光光度计进行比色测定,并以每小时每g鲜重产生的亚硝酸根 表示酶活力。 (3)标准曲线的制作:吸取不同浓度的亚硝酸钠溶液,于试管中,依照梯度绘制O.D- 质量浓度曲线。 5)不同时间段蚕豆植株光合作用强度的测定 (1)准备:打开主机前后面板上的电源、气泵开关,打开前面板的开关ON。按照屏 幕提示,按数字键选择一一中英文菜单、数据保存、用户设置、测量方式(默认单叶闭 路)等内容 (2)核对测量参数:系统容积为测量系统的空气容积,包括叶室、气管及内部测量系 统的容积,本系统标称为0.25L;间隔时间为系统内部自动采集的间隔时间,如C3作 物,设为3s:C4作物,设为25:作物叶子在叶室夹紧后见光部分的面积为测定面积,后又用高锰酸钾溶液泡种子 15 分钟，为种子消毒，将种子从高猛酸钾溶液中捞出， 种眼朝下放在早已经准备好的有土的孔中。按时浇水，保持温度和适时光照，使其 发芽。 然后移栽，进一步得到有真叶的植株，并设置酸碱梯度为 pH=5、6.5、8，每个 梯度 30 个，每个 pH 设置 10 个平行样。 2） 不同时间段蚕豆植株表观形态变化的测定： 在植株生长的时期定时测量植株表观形态变化，包括高度，色泽，健康程度等指标。 3） 不同时间段蚕豆植株根系活力的测定： （1）定性观察： 将洗净的植株根系浸入盛有 25ug/ml 的 a-萘胺溶液的容器中，容器外用黑纸包裹， 静置 24——36 小时候观察水稻根系的着色状况。着色深者，其根系活力较着色潜者大。 （2）定量测定： a.a-萘胺含量的测定：称取1-2g 洗净的根系放在100ml三角烧瓶中。然后加50ug/ml 的 a-萘胺溶液与 pH=7.0 磷酸缓冲液等量混合液 50ml，轻轻振荡，静置 10min，吸取 2ml 测定 a-萘胺的含量，，作为实验开始时的数据。 b.a-萘胺含量的测定：吸取 2ml 待测液，加入 10ml 蒸馏水，再在其中加入 1%对 氨基苯磺酸 1ml 和亚硝酸钠溶液 1ml，再用蒸馏水定容到 25ml。在 20-60min 内 510nm 处比色，读取 O.D 值，在标准曲线上查得相应的 a-萘胺含量。从实验开始 10min 时的 数据减去自动氧化的数值，即为溶液中所有的 a-萘胺量以 ug/（g.h）表示。还应将根系 烘干称其干重。 c.绘制 a-萘胺标准曲线：取 50ug/ml 的 a-萘胺溶液，配制成 50、45、40、35、30、 25、20、15、10、5ug/ml 的系列溶液，以 O.D 值为纵坐标，a-萘胺含量为横坐标，绘 制标准曲线。 4）不同时间段蚕豆植株硝酸还原酶的测定（以离体法为例）： (1) 酶的提取： 称取 0.5g 洗净的材料放于研钵中，冷冻 30min。然后加入适量石英砂和提取液 2ml， 磨成匀浆。匀浆用二层纱布过滤，在 0-4 度，4000r/min 冷冻离心 20min，得到的上清 液即为酶的粗提液。 (2)亚硝酸根含量测定：吸取酶的粗提液 0.2ml 于一试管中，加入 0.5ml 硝酸钾溶液， 0.3mlNADH，混合后在 25 度保温 30min。保温结束后立即加入磺胺试剂 2ml 及 a-萘胺试 剂 2ml，混合摇匀，用分光光度计进行比色测定，并以每小时每 g 鲜重产生的亚硝酸根 表示酶活力。 （3）标准曲线的制作：吸取不同浓度的亚硝酸钠溶液，于试管中，依照梯度绘制 O.D- 质量浓度曲线。 5）不同时间段蚕豆植株光合作用强度的测定： （1）准备： 打开主机前后面板上的电源、气泵开关，打开前面板的开关 ON。按照屏 幕提示，按数字键选择——中英文菜单、数据保存、用户设置、测量方式（默认单叶闭 路）等内容。 （2）核对测量参数：系统容积为测量系统的空气容积，包括叶室、气管及内部测量系 统的容积，本系统标称为 0.25 L；间隔时间为系统内部自动采集的间隔时间，如 C3 作 物，设为 3s；C4 作物，设为 2s；作物叶子在叶室夹紧后见光部分的面积为测定面积