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影响电泳的主要因素 1. 电泳介质的pH-当介质的pH等于某种两性物质的等电点时,该物质处于等 电状态,即不向正极或负极移动。当介质pH小于其等电点时,则呈正离子状态, 移向负极;反之,介质H大于其等电点时,则呈负离子状态,移向正极。因此, 任何一种两性物质的混合物电泳均受介质pH的影响,即决定于两性物质的带电 状态及其量。 2.缓冲液的离子强度离子强度低,电泳速度快,分离区带不易清晰;离子 强度高,电泳速度慢,但区带分离清晰。如离子强度过低,缓冲液的缓冲量小, 不易维持H的恒定;离子强度过高,则降低蛋白质的带电量(压缩双电层)使电 泳速度减慢。所以常用离子强度为0.02~0.2之间。 3.电场强度电场强度和电泳速度成正比关系。电场强度以每厘米的电势差 计算,也称电势梯度。如纸电泳的滤纸长15c,两端电压(电势差)为150V,则 电场强度为150/15=10V/cm,电场强度愈高,则带电粒子的移动愈快。电压 增加,相应电流也增大,电流过大时易产生热效应可使蛋白质变性而不能分离。 4.电渗作用-在电场中,液体对固体的相对移动,称为电渗。如滤纸中含有 表面带负电荷的羧基,溶液则向负极移动。由于电渗现象与电泳同时存在,所 以电泳的粒子移动距离也受电渗影响,如纸上电泳蛋白质移动的方向与电渗现 象相反,则实际上蛋白质泳动的距离,等于电泳移动距离减去电渗距离。如电 泳方向和电渗方向一致,其蛋白质移动距离,等于二者相加。影响电泳的主要因素 1.电泳介质的pH ------ 当介质的pH等于某种两性物质的等电点时,该物质处于等 电状态,即不向正极或负极移动。当介质pH小于其等电点时,则呈正离子状态, 移向负极;反之,介质pH大于其等电点时,则呈负离子状态,移向正极。因此, 任何一种两性物质的混合物电泳均受介质pH的影响,即决定于两性物质的带电 状态及其量。 2.缓冲液的离子强度 ------ 离子强度低,电泳速度快,分离区带不易清晰;离子 强度高,电泳速度慢,但区带分离清晰。如离子强度过低,缓冲液的缓冲量小, 不易维持pH的恒定;离子强度过高,则降低蛋白质的带电量(压缩双电层)使电 泳速度减慢。所以常用离子强度为0.02~0.2之间。 3.电场强度 ------ 电场强度和电泳速度成正比关系。电场强度以每厘米的电势差 计算,也称电势梯度。如纸电泳的滤纸长15cm,两端电压(电势差)为150V,则 电场强度为150/15=10 V/cm,电场强度愈高,则带电粒子的移动愈快。电压 增加,相应电流也增大,电流过大时易产生热效应可使蛋白质变性而不能分离。 4.电渗作用 ------ 在电场中,液体对固体的相对移动,称为电渗。如滤纸中含有 表面带负电荷的羧基,溶液则向负极移动。由于电渗现象与电泳同时存在,所 以电泳的粒子移动距离也受电渗影响,如纸上电泳蛋白质移动的方向与电渗现 象相反,则实际上蛋白质泳动的距离,等于电泳移动距离减去电渗距离。如电 泳方向和电渗方向一致,其蛋白质移动距离,等于二者相加
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