实验步骤 ■培养细胞(96孔板,每组3正常、3损伤、3损伤恢复) PBS洗,5minX3次(轻轻地洗涤) ■甲醇固定10min ■PBS洗,5minX3次 加入封闭液(1:10)25l,37℃,30min 加一抗(1:30025,37℃,1h(或4C过夜) PBS洗,5minX3次 加二抗(1 mI Pbs加入生物素化山羊抗小鼠IgG10) 25{,37℃,1h ■PBS洗,5minx3次实验步骤 ◼ 培养细胞（96孔板，每组3正常、3损伤、3损伤恢复） ◼ PBS洗，5min X 3次 (轻轻地洗涤) ◼ 甲醇固定10min ◼ PBS洗，5min X 3次 ◼ 加入封闭液（1:10） 25µl，37 ℃，30min ◼ 加一抗（1:300）25µl，37℃，1h (或4℃过夜) ◼ PBS洗，5min X 3次 ◼ 加二抗（1ml PBS加入生物素化山羊抗小鼠IgG 10µl） 25µl，37 ℃，1h ◼ PBS洗，5min X 3次