1)从材料中分离或制备目的基因或DNA片段。 2)目的基因或DNA片段与载体连接成重组DNA分子。 3)重组DNA分子引入宿主细胞，在其中扩增和表达。 3.简单介绍如何获得目的DNA? 答：(1)从生物基因组中直接分离目的DNA。直接分离基因 的最常用的方法是“鸟枪法”即用限制性内切酶将供体细胞中的DNA 切成许多片段，将这些片段分别与载体相连，然后通过载体分别转入 不同的受体细胞，让供体细胞提供的所有DNA片段分别在各个细胞 中大量复制，并通过一定的方法把目的DNA片段从细胞中分离出来。 在一般情况下，利用探针原位杂交法筛选和检测重组质粒，可以较为 简便地获得目的基因DNA片段，但若没有合适的探针可用，则如同 盲人打鸟，工作量很大。 (2)人工合成日的DNA片段，人工合成基因的方法主要有两 条途径：一是以目的基因转录成的RNA为模板，逆转录成互补的 单链DNA,然后在酶的作用下合成双链DNA,从而获得所需要的基 因：二是根据已知的蛋白质的氨基酸序列推测出相应的RNA序列， 然后按碱基互补配对原则，推测出它的结构基因的核苷酸序列，再通 过化学的方法，以单核苷酸为原料合成目的基因。如果目的基因的全 序列是已知的，则可以利用化学合成法直接合成。 (3)PCR反应合成目的DNAPCR扩增技术也称为聚合酶链式 反应(polymerase chain reaction),是以DNA变性、复制的某些特性 为原理设计的，可从痕量的DNA样品中特异快速扩增某一区域的1）从材料中分离或制备目的基因或 DNA 片段。 2）目的基因或 DNA 片段与载体连接成重组 DNA 分子。 3）重组 DNA 分子引入宿主细胞，在其中扩增和表达。 3. 简单介绍如何获得目的 DNA？ 答：（1）从生物基因组中直接分离目的 DNA。直接分离基因 的最常用的方法是“鸟枪法”即用限制性内切酶将供体细胞中的 DNA 切成许多片段，将这些片段分别与载体相连，然后通过载体分别转入 不同的受体细胞，让供体细胞提供的所有 DNA 片段分别在各个细胞 中大量复制，并通过一定的方法把目的 DNA 片段从细胞中分离出来。 在一般情况下，利用探针原位杂交法筛选和检测重组质粒，可以较为 简便地获得目的基因 DNA 片段，但若没有合适的探针可用，则如同 盲人打鸟，工作量很大。 （2）人工合成目的 DNA 片段，人工合成基因的方法主要有两 条途径：一是以目的基因转录成的 mRNA 为模板，逆转录成互补的 单链 DNA，然后在酶的作用下合成双链 DNA，从而获得所需要的基 因；二是根据已知的蛋白质的氨基酸序列推测出相应的 mRNA 序列， 然后按碱基互补配对原则，推测出它的结构基因的核苷酸序列，再通 过化学的方法，以单核苷酸为原料合成目的基因。如果目的基因的全 序列是已知的，则可以利用化学合成法直接合成。 （3）PCR 反应合成目的 DNAPCR 扩增技术也称为聚合酶链式 反应（polymerase chain reaction），是以 DNA 变性、复制的某些特性 为原理设计的，可从痕量的 DNA 样品中特异快速扩增某一区域的