24~96h或更长时间,而连续细胞系和肿瘤细胞的潜伏期则较短,仅6~24h。另 外,细胞接种密度大时潜伏期常会变短。 2.对数生长期当细胞分裂相开始出现并逐渐增多,便标志着潜伏期的结 束和对数生长期( logarithmic growth phase)的开始。对数生长期是细胞增殖分 裂最旺盛的阶段。对数生长期细胞分裂相数量的多少常作为判定细胞生长旺盛与 否的一个重要标志,一般用分裂指数( mitotic index,M)来表示:分裂相在整 个细胞群中所占的百分比。体外培养细胞的分裂指数受细胞种类、培养液成分 营养条件、pH、培养箱温度等多种因素的影响。一般细胞的分裂指数多介于 0.1%~0.5%之间,原代细胞分裂指数较低,连续细胞和肿瘤细胞分裂指数可高 达3%~5%。对数增生期是细胞一代生存期中活力最好的时期,因此是进行各种 实验最好的和最主要的阶段。 3.停滞期当细胞数量达饱和密度后,细胞遂停止増殖,进入停滞期 ( stagnate phase)。此时细胞数量不再增加,故也称平台期( plateau phase) 处于此期的细胞虽不增殖,但仍有代谢活动,但随着培养液中营养渐趋耗尽,代 谢产物的积累、pH值的降低,此时需要进行及时的传代培养,否则细胞会因营 养匮乏、中毒等原因,发生形态改变,重则从底物脱落死亡。 第三节原代培养与传代培养 原代培养 将动物机体中待培养组织从机体中取出,然后用各种消化性酶(如胰蛋白酶) 消化,或用机械方法处理,将组织分离成单细胞,最后添加适当的培养基培养, 使细胞得以生存、生长和繁殖,这一过程称原代培养。原代培养的细胞由于其和 机体细胞在形态结构、功能等方面非常接近,常被用作药理实验重要的研究材料 (一)所需设备与试剂 超净工作台、细胞培养箱、离心机、离心管、倒置显微镜、普通光学显微镜、 吸管、废液缸、培养瓶、平皿、移液管、纱布、手术器械、血球计数板、水浴锅 (37℃)、添加有002%EDTA的025%胰蛋白酶消化液、RPM1640细胞培养 基(添加有20%的FBS)、 Hanks液、75%酒精溶液、碘酒等。24～96h 或更长时间，而连续细胞系和肿瘤细胞的潜伏期则较短，仅 6～24h。另 外，细胞接种密度大时潜伏期常会变短。 2．对数生长期 当细胞分裂相开始出现并逐渐增多，便标志着潜伏期的结 束和对数生长期（logarithmic growth phase）的开始。对数生长期是细胞增殖分 裂最旺盛的阶段。对数生长期细胞分裂相数量的多少常作为判定细胞生长旺盛与 否的一个重要标志，一般用分裂指数（mitotic index，MI）来表示：分裂相在整 个细胞群中所占的百分比。体外培养细胞的分裂指数受细胞种类、培养液成分、 营养条件、pH、培养箱温度等多种因素的影响。一般细胞的分裂指数多介于 0.1%～0.5%之间，原代细胞分裂指数较低，连续细胞和肿瘤细胞分裂指数可高 达 3%～5%。对数增生期是细胞一代生存期中活力最好的时期，因此是进行各种 实验最好的和最主要的阶段。 3．停滞期 当细胞数量达饱和密度后，细胞遂停止增殖，进入停滞期 （stagnate phase）。此时细胞数量不再增加，故也称平台期（plateau phase）。 处于此期的细胞虽不增殖，但仍有代谢活动，但随着培养液中营养渐趋耗尽，代 谢产物的积累、pH 值的降低，此时需要进行及时的传代培养，否则细胞会因营 养匮乏、中毒等原因，发生形态改变，重则从底物脱落死亡。 第三节 原代培养与传代培养 一、原代培养 将动物机体中待培养组织从机体中取出，然后用各种消化性酶（如胰蛋白酶） 消化，或用机械方法处理，将组织分离成单细胞，最后添加适当的培养基培养， 使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。原代培养的细胞由于其和 机体细胞在形态结构、功能等方面非常接近，常被用作药理实验重要的研究材料。 （一）所需设备与试剂 超净工作台、细胞培养箱、离心机、离心管、倒置显微镜、普通光学显微镜、 吸管、废液缸、培养瓶、平皿、移液管、纱布、手术器械、血球计数板、水浴锅 （37℃）、添加有 0.02%EDTA 的 0.25%胰蛋白酶消化液、RPMI 1640 细胞培养 基（添加有 20％的 FBS）、Hanks 液、75%酒精溶液、碘酒等