均使用相同的模板，相同的引物以及四种脱氧核苷酸：并在四组反应中各加入适量的四种之一的双脱氧核苷酸，使其随机地接入DNA链中，使 链合成终止，产生相应的四组具有特定长度的、不同长短的DNA链。这四组DNA链再经过聚丙烯酸胺凝胶电泳按链的长短分离开，经过放射 自显影显示区带，就可以直接读出被测DNA的核苷酸序列（图15·3）。 999 0= 0= 00 3一松游冥核替能 2一脱名候查酸 JAdAUTdTdGdCdTaAdGdcdGdCdTaAdGdc? AdAdCiGrAdTdCHG入Tacan9 dATP dGTr 汽时 OGI 10T dCTP CTP dTIP 打TP eTTP m ddATp ddGTP ddTTP 3 -dAdAdTdTUGdCHTMGdCdGdCdTdAddG AdAdTaT&GdcTdAdGdCdGdrdT s-dAlATUTUGdCTd. s-dAdAdTd'rdGdCITdAdGdCddG -dadAdTdTGdCrdAdGddc s-oAdAd s-dAdAdTU IdGdCaTudA s-dAlAd'TuTuGdec s'-dAdAdTdTddG s-cAdAd rddT s-dAddA 5-ddA 所湖疗列 图15·3双脱氧链终止法测定DNA序列原理示意 2.Maxam?Gilbert DNA化学降解法 这一方法的基本步骤为(1)先将DNA的未端之一进行标记（通常为放射性同位素32P:(2)在多组互相独立的化学反应中分别进行特定碱基的 化学修饰；(3)在修饰碱基位置化学法断开DNA链；(4)聚丙烯酰胺凝胶电泳将DNA链按长短分开：（⑤）根据放射自显影显示区带，直接读出 DNA的核苷酸序列（图15-4）. S'HO-GATCGGACCT 3 单端成射同位聚杯记 (此例为了一表殊标记) S HPGATOGGACCT 3 不完伞修饰 修饰G修饰G和A修悔T和C修修C 化学裂解 」电冰分离 GG+A T+CC 余长核酸 PGATOGGACC PGATOGGAC C] NPGATCGGAC 方 POATOGG☒四 PGATCG囹 PGATC G PGAT C] PGA O因 Ψ 口表示触锋饰碱基及断裂位置 图15·4化学裂解法测定DNA的核苷酸序列 第三节DNA的二级结构与功能 (一)DNA的二级结构？双螺旋结构模型(double helixmodel))均使用相同的模板，相同的引物以及四种脱氧核苷酸；并在四组反应中各加入适量的四种之一的双脱氧核苷酸，使其随机地接入DNA链中，使 链合成终止，产生相应的四组具有特定长度的、不同长短的DNA链。这四组DNA链再经过聚丙烯酸胺凝胶电泳按链的长短分离开，经过放射 自显影显示区带，就可以直接读出被测DNA的核苷酸序列(图15－3)。 图15－3 双脱氧链终止法测定DNA序列原理示意 2.Maxam?Gilbert DNA化学降解法 这一方法的基本步骤为(1)先将DNA的末端之一进行标记(通常为放射性同位素32P；(2)在多组互相独立的化学反应中分别进行特定碱基的 化学修饰；(3)在修饰碱基位置化学法断开DNA链；(4)聚丙烯酰胺凝胶电泳将DNA链按长短分开；(5)根据放射自显影显示区带，直接读出 DNA的核苷酸序列(图15－4)。 图15－4 化学裂解法测定DNA的核苷酸序列 第三节 DNA的二级结构与功能 (一)DNA的二级结构?双螺旋结构模型(double helixmodel)