实验二 蠕虫学粪便检查法(二) ·内容 2,尼龙筛兜集卵法 3.虫卵计数法 (1)斯陶尔氏法 (2)麦克马斯特氏法 4.幼虫检查法 微注 1的 :掌握粪便中虫卵检查和幼虫分离法,培养幼虫及虫卵计数法的操作技术,并学 会测微器的使用及 测微方法 蠕虫虫卵检查法(之二) 1,沉淀法 采用普通清水处理被检粪便,使虫卵沉淀集中,便于检查。本法适合检查 各种虫卵,而比重较大的虫卵,如吸虫卵、棘头虫卵等尤宜采用此法。 O自然沉汽10克,放/ 于净的烧杯内加水100毫升以上, 沉去上清 液 吸虫卵 ②离心沉淀法 取粪便12克,放在干净的小烧怀内,约加10倍量的水,充分混匀成悬浮液,再用40、60目 铜丝筛过滤至另一干净的离心管中,放入离心机内。也可用自然沉淀法处理过的滤液倒入离心管 中,放在离心机内,以1500转/分的速度离心23分钟。此时,因虫卵比重大,经离心后沉于管底, 然后倒去 清液,取沉渣镜检。 集卵 过0m的铜丝筛过波 滤 内到 液 足龙筛过 并 此法适用 尚的由的 如片形吸虫 得科吸 本分体 上处理,粗大粪渣被铜丝筛滤除,纤细的粪渣(直径小于40微米)和可溶性色素均被冲洗走而使虫 卵集中。 3.虫卵计数法:测定家畜每克粪便的虫卵数(EPG) 虫卵计数法是测定每克家畜粪便中的虫卵数,而以此推断家畜体内某种寄生虫的寄生数 量,有时尚以使用虫药前后虫用数的对,岗检 司 个大致的判断 影 此外寄生虫的分布不 状 >量 内 数 驱虫药的服用等很多因素均影 里卵的数量和体内虫休数量的比例关 稠 虽然如止 虫卵计数仍被用作某种寄生虫感染强度的指标 (1)斯陶尔氏法(Stel1's metheod) 在一 小玻璃容器上(如小三角烧杯或大试管)的56毫升和60毫升处各做一标记,先取0.4% 的氢氧化钠溶液注到容器56毫升处,再加入被检粪便完全破碎混匀,接着在混匀的情况下, 以1昆 升吸管取粪便液0.15毫升,滴下23张载玻片上,覆以盖玻片, 在显微镜下秩序检查,统计其中虫卵 马斯特民 个数室中群数是二片玻片制成, 常将甘中一片切去 使之 另一片窄些。在较窄的玻片上刻以1平方厘米方格 一 而后选取厚度1.5章米的玻片切成小条垫于 玻片间,以玻璃粘合剂粘合。这样两玻片间每个方格的容量为0.15立方厘米,即0.15毫升见下 图: 实验二 蠕虫学粪便检查法(二) 一.内容: 1.沉淀法 (1)自然沉淀法 (2)离心沉淀法 2.尼龙筛兜集卵法 3.虫卵计数法 (1)斯陶尔氏法 (2)麦克马斯特氏法 4.幼虫检查法 (1)漏斗幼虫分离法(贝尔曼氏法) (2)平皿法(法依德氏幼虫分离法) 5.测微法 二.目的:掌握粪便中虫卵检查和幼虫分离法,培养幼虫及虫卵计数法的操作技术,并学 会测微器的使用及测微方法。 三.参考资料: (一).蠕虫虫卵检查法(之二) 1.沉淀法 采用普通清水处理被检粪便,使虫卵沉淀集中,便于检查。本法适合检查 各种虫卵,而比重较大的虫卵,如吸虫卵、棘头虫卵等尤宜采用此法。 ①自然沉淀法 取粪便5~10克,放入干净的烧杯内加水100毫升以上,搅匀成粪液,通过40、60目铜丝筛过 滤。滤液收集于三角烧瓶或烧杯中,静置沉淀20~30分钟后,倾去上层液,保留沉渣,再加水混匀, 再沉淀。如此反复直到上层液体透明为止,倒去上清液,吸取沉渣涂片镜检。此法特别适用于检查 吸虫卵。 ②离心沉淀法 取粪便1~2克,放在干净的小烧怀内,约加10倍量的水,充分混匀成悬浮液,再用40、60目 铜丝筛过滤至另一干净的离心管中,放入离心机内。也可用自然沉淀法处理过的滤液倒入离心管 中,放在离心机内,以1500转/分的速度离心2~3分钟。此时,因虫卵比重大,经离心后沉于管底, 然后倒去上清液,取沉渣镜检。 2.尼龙筛兜集卵法 取粪便5~10克,加水搅匀,先通过40、60目的铜丝筛过滤,滤下液再通过260目尼龙筛过滤,并 在尼龙筛兜中连续加水冲洗,直到洗出液透明为止,而后挑取兜内粪渣做成抹片检查。此法适用于 宽度大于60微米的虫卵,如片形吸虫、姜片吸虫、同盘科吸虫、日本分体吸虫等的虫卵。通过以 上处理,粗大粪渣被铜丝筛滤除,纤细的粪渣(直径小于40微米)和可溶性色素均被冲洗走而使虫 卵集中。 3.虫卵计数法:测定家畜每克粪便的虫卵数(EPG) 虫卵计数法是测定每克家畜粪便中的虫卵数,而以此推断家畜体内某种寄生虫的寄生数 量,有时尚以使用驱虫药前后虫卵数量的对比,以检查驱虫效果。 虫卵计数所得数字,受很多因素影响。因此只能对寄生虫的寄生量做一个大致的判断。影 响虫卵计数精确性的因素,首先是虫卵在粪便内的分布不匀,因此测定少量粪便内的虫卵量以推算 全部粪便中的虫卵总量就不会准确。此外寄生虫的年龄、宿主的免疫状态、粪便的浓稠度、雌虫的 数量,驱虫药的服用等很多因素均影响着排出虫卵的数量和体内虫体数量的比例关系。虽然如此, 虫卵计数仍被用作某种寄生虫感染强度的指标。 (1)斯陶尔氏法(Stell's metheod) 在一小玻璃容器上(如小三角烧杯或大试管)的56毫升和60毫升处各做一标记,先取0.4% 的氢氧化钠溶液注到容器56毫升处,再加入被检粪便完全破碎混匀,接着在混匀的情况下,以1毫 升吸管取粪便液0.15毫升,滴下2~3张载玻片上,覆以盖玻片,在显微镜下秩序检查,统计其中虫卵 总数(注意不可遗漏和重复)。因0.15毫升粪液中实际含原粪量是0.15×4/60=0.01克。因此所得 虫卵总数乘100即为每克粪便中的虫卵数。本法适用于大部分蠕虫卵的计数。 (2)麦克马斯特氏法(MeMastr's metlod) 本法是将虫卵浮集于一个计数室中。计数是由二片载玻片制成,常将其中一片切去一条,使之较 另一片窄些。在较窄的玻片上刻以1平方厘米方格二个,而后选取厚度1.5毫米的玻片切成小条垫于 二玻片间,以玻璃粘合剂粘合。这样两玻片间每个方格的容量为0.15立方厘米,即0.15毫升见下 图: