680 北京科技大学学报 第31卷 的菌株，培养优势菌株[6).具体操作为：称取活性污 定为稀释倒平板法分离得到的聚磷菌株的除磷效率 泥1g放入盛有100mL的无菌水三角瓶中，于 普遍优于涂布稀释法的分离技术（见图1），这是由 30℃、150rmin1的摇床上培养24h后，按1%的 于大部分聚磷菌属于兼性厌氧菌，稀释倒平板法可 接种量转入合成废水培养基中，逐渐增加培养液中 以为菌群提供一定条件的厌氧环境，最终筛选出两 磷的质量浓度，观察其生长情况， 株聚磷效果较好的菌株，并分别命名为A菌和E菌 分离纯化采用两种分离方法：涂布稀释法和稀 (见表1)，确定为本实验菌株 释倒平板法[]. (2)评价指标.对聚磷微生物进行显微镜镜 检：培养液中磷的测定采用钼酸铵分光光度法[8]； 除两效率 2 20% C0D的测定采用重铬酸钾法). 屏德数中 (3)菌种鉴定，菌种的生理生化鉴定参考相关 60% w。 除磷效率 >60% 文献[10-11] 2结果和讨论 a (b) 2.1聚磷菌的分离和筛选 图1各菌除磷率的分布·()涂布稀释法：(b)稀释倒平板法 经富集培养后采用两种分离纯化技术进行初筛 Fig.I Distribution of phosphorus removal rate of bacteria:(a) 和复筛，通过测定培养液中磷的质量浓度，最终确 coating method:(b)inverted plate dilution method 表1不同磷源质量浓度条件下各菌的除磷率 Table 1 Phosphorus removal rate for the various strains of bacteria under the conditions of different concentrations of phosphorus source 菌株 除磷率/% 名称 磷质量浓度2.0mgL 磷质量浓度6.8mgL磷质量浓度11.4mgL磷质量浓度16.0mgL1磷质量浓度20.5mgL-1 A 99.5 78.9 52.5 22.7 15.7 B 89.0 42.2 21.3 16.1 2.8 87.3 55.4 34.6 22.9 7.8 60.1 37.2 14.1 9.2 E 95.1 79.2 44.1 26.2 16.9 80.2 38.4 20.0 G 65.2 22.4 2.2菌种的鉴定 bacter sp·). 两株分离出的高效聚磷菌见图2.由图可见：A 表2聚磷菌生理生化特性 菌落呈不规则生长，菌落直径约为2~3mm,表面光 Table 2 Physiological and biochemical characteristics of PAOs 滑，成半透明状：革兰氏染色为阳性菌，E菌落表面 实验 A菌落 E菌落 光滑，呈乳白色，生长旺盛，表面微微凸起；革兰氏染 甲基实验 色阳性呈短杆状，对两菌进行各项生理生化指标测 VP实验 定（表2），初步鉴定A、E菌为不动杆菌属(Acineto 尿素水解 产H2s实验 + 纤维素分解 柠檬酸盐实验 硝酸盐实验 + 动力性实验 2.3聚磷菌生长条件特性 图2聚磷菌株分离照片.(a)聚磷菌A;(b)聚磷菌E Fig.2 PAOs isolated photos:(a)PAOs A:(b)PAOs E (1)聚磷菌生长曲线的测定，实验采用OD值的菌株‚培养优势菌株［6］．具体操作为：称取活性污 泥1g 放入盛有100mL 的无菌水三角瓶中‚于 30℃、150r·min －1的摇床上培养24h 后‚按1％的 接种量转入合成废水培养基中‚逐渐增加培养液中 磷的质量浓度‚观察其生长情况． 分离纯化采用两种分离方法：涂布稀释法和稀 释倒平板法［7］． （2） 评价指标．对聚磷微生物进行显微镜镜 检；培养液中磷的测定采用钼酸铵分光光度法［8］； COD 的测定采用重铬酸钾法［9］． （3） 菌种鉴定．菌种的生理生化鉴定参考相关 文献［10－11］． 2 结果和讨论 2∙1 聚磷菌的分离和筛选 经富集培养后采用两种分离纯化技术进行初筛 和复筛．通过测定培养液中磷的质量浓度‚最终确 定为稀释倒平板法分离得到的聚磷菌株的除磷效率 普遍优于涂布稀释法的分离技术（见图1）‚这是由 于大部分聚磷菌属于兼性厌氧菌‚稀释倒平板法可 以为菌群提供一定条件的厌氧环境．最终筛选出两 株聚磷效果较好的菌株‚并分别命名为 A 菌和 E 菌 （见表1）‚确定为本实验菌株． 图1 各菌除磷率的分布．（a） 涂布稀释法；（b） 稀释倒平板法 Fig．1 Distribution of phosphorus removal rate of bacteria：（a） coating method；（b） inverted plate dilution method 表1 不同磷源质量浓度条件下各菌的除磷率 Table1 Phosphorus removal rate for the various strains of bacteria under the conditions of different concentrations of phosphorus source 菌株 名称 除磷率／％ 磷质量浓度2∙0mg·L －1 磷质量浓度6∙8mg·L －1 磷质量浓度11∙4mg·L －1 磷质量浓度16∙0mg·L －1 磷质量浓度20∙5mg·L －1 A 99∙5 78∙9 52∙5 22∙7 15∙7 B 89∙0 42∙2 21∙3 16∙1 2∙8 C 87∙3 55∙4 34∙6 22∙9 7∙8 D 60∙1 37∙2 14∙1 9∙2 － E 95∙1 79∙2 44∙1 26∙2 16∙9 F 80∙2 38∙4 20∙0 － － G 65∙2 22∙4 － － － 图2 聚磷菌株分离照片．（a） 聚磷菌 A；（b） 聚磷菌 E Fig．2 PAOs isolated photos：（a） PAOs A；（b） PAOs E 2∙2 菌种的鉴定 两株分离出的高效聚磷菌见图2．由图可见：A 菌落呈不规则生长‚菌落直径约为2～3mm‚表面光 滑‚成半透明状；革兰氏染色为阳性菌．E 菌落表面 光滑‚呈乳白色‚生长旺盛‚表面微微凸起；革兰氏染 色阳性呈短杆状．对两菌进行各项生理生化指标测 定（表2）‚初步鉴定 A、E 菌为不动杆菌属（ Acineto￾bacter sp．）． 表2 聚磷菌生理生化特性 Table2 Physiological and biochemical characteristics of PAOs 实验 A 菌落 E 菌落 甲基实验 － ＋ V－P 实验 － － 尿素水解 ＋ ＋ 产 H2S 实验 － ＋ 纤维素分解 ＋ － 柠檬酸盐实验 ＋ ＋ 硝酸盐实验 ＋ ＋ 动力性实验 ＋ － 2∙3 聚磷菌生长条件特性 （1） 聚磷菌生长曲线的测定．实验采用 OD 值 ·680· 北 京 科 技 大 学 学 报 第31卷