基因产物β-内酰胺酶活性增加37倍左右,但Fn急剧下降。此外,利用λ噬菌体P 启动子的温度敏感性,采用二级连续培养方式,第1罐于低温下培养以降低表达效 率,第2罐高温培养,对提髙表达效率亦是有效的。 此外,当质粒拷贝数与某些化合物有关时,亦可采取添加或去除相应化合物的 双阶段连续过滤培养法以提高拷贝数和表达效率。如用含有在色氨酸启动子下游接 有β-半乳糖苷酶基因的重组质粒pMCT98的基因工程菌进行单级连续培养,并结合 02μum孔径陶瓷过滤器装置(图7-2),开始培养液含色氨酸,表达效率低,当生长 浊度达到10时,进行交叉流动过滤,且供给不含色氨酸料液,结果如图7-23所示。 过滤达15min后培养液中已测不出色氨酸,表达效率增加,β半乳糖苷酶活力剧增。 最终浊度达150(相当于含6%千细胞,β半乳糖苷酶约占总蛋白量8% 由此可知,在基因工程细胞培养工程中,需根据其固有特点和具体情况,采取 相应措施、提髙质粒稳定性,增加质粒拷贝数,实现培养条件优化,提髙表达效率。 300 20 冖类 100 日 100 x 10 10 0.5 培养时间(h) 图7-2l温度调节型质粒保持菌株的双阶毀培养 虚线为培养温度由25℃提高到37℃的时间基因产物 β-内酰胺酶活性增加 37 倍左右，但 Fn 急剧下降。此外，利用 λ 噬菌体 PL 启动子的温度敏感性，采用二级连续培养方式，第 1 罐于低温下培养以降低表达效 率，第 2 罐高温培养，对提高表达效率亦是有效的。 此外，当质粒拷贝数与某些化合物有关时，亦可采取添加或去除相应化合物的 双阶段连续过滤培养法以提高拷贝数和表达效率。如用含有在色氨酸启动子下游接 有 β-半乳糖苷酶基因的重组质粒 pMCT98 的基因工程菌进行单级连续培养，并结合 0.2μm 孔径陶瓷过滤器装置(图 7-22)，开始培养液含色氨酸，表达效率低，当生长 浊度达到 10 时，进行交叉流动过滤，且供给不含色氨酸料液，结果如图 7-23 所示。 过滤达 15min 后培养液中已测不出色氨酸，表达效率增加，β-半乳糖苷酶活力剧增。 最终浊度达 150(相当于含 6%干细胞)，β 半乳糖苷酶约占总蛋白量 8%。 由此可知，在基因工程细胞培养工程中，需根据其固有特点和具体情况，采取 相应措施、提高质粒稳定性，增加质粒拷贝数，实现培养条件优化，提高表达效率