一些。通过差速离心可将细胞器初步分离,但常需进一步通过密度梯离心再行分 离纯化 密度梯度离心( density grad ient centrifugation)是用一定的介质在离心管内 形成一连续或不连续的密度梯度,将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部,通过重 力或离心力场的作用使细胞分层、分离。这类分离又可分为速度沉降和等密度沉 降两种。密度梯度离心常用的介质为氯化铯,蔗糖和多聚蔗糖。分离活细胞的介 质要求:能产生密度梯度,且密度高时,粘度不高;pH中性或易调为中性;浓 度大时渗透压不大;对细胞无毒。①速度沉降( veloc ity sedimentation)主要用于 分离密度相近而大小不等的细胞或细胞器。这种方法所采用的介质密度较低,介 质的最大密度应小于被分离生物颗粒的最小密度。生物颗粒(细胞或细器)在十 分平缓的密度梯度介质中按各自的沉降系数以不同的速度沉降而达到分离:②等 密度沉降( isopycnic sed imentation)适用于分离密度不等的颗粒。细胞或细胞器 在连续梯度的介质中经足够大离心力和足够长时间则沉降或漂浮到与自身密度 相等的介质处,并停留在那里达到平衡,从而将不同密度的细胞或细胞器分离 等密度沉降通常在较高密度的介质中进行。介质的最高密度应大于被分离组分的 最大密度。再者,这种方法所需要的力场通常比速度沉降法大10-100倍,故往往 需要高速或超速离心,离心时间也较长。大的离心力、长的离心时间都对细胞不 利。因此,这种方法适于分离细胞器,而不太适于分离和纯化细胞 分离亚细胞组分的第三步是对分级分离得到的组分进行分析,以确认。常要 的分析方法包括形态和功能鉴定 第二节细胞核与线粒体的分级分离 、所需试剂及设备 小白鼠、冰块、玻璃匀浆器、普通离心机、台式高速离心机、普通天平、光 学显微镜、载玻片、盖玻片、刻度离心管、髙速离心管、滴管、10ml量筒、25m1 烧杯、玻璃漏斗、解剖剪、镊子、吸水纸、纱布、蜡盘、平皿、牙签。025moL 蔗糖一0003 moll cacl2溶液、1%甲苯胺兰染液、002%詹纳斯绿B染液、 0.9%NaCl溶液一些。通过差速离心可将细胞器初步分离，但常需进一步通过密度梯离心再行分 离纯化。 密度梯度离心（density gradient centrifugation） 是用一定的介质在离心管内 形成一连续或不连续的密度梯度，将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部，通过重 力或离心力场的作用使细胞分层、分离。这类分离又可分为速度沉降和等密度沉 降两种。密度梯度离心常用的介质为氯化铯，蔗糖和多聚蔗糖。分离活细胞的介 质要求：能产生密度梯度，且密度高时，粘度不高； pH中性或易调为中性；浓 度大时渗透压不大；对细胞无毒。①速度沉降（velocity sedimentation）主要用于 分离密度相近而大小不等的细胞或细胞器。这种方法所采用的介质密度较低，介 质的最大密度应小于被分离生物颗粒的最小密度。生物颗粒（细胞或细器）在十 分平缓的密度梯度介质中按各自的沉降系数以不同的速度沉降而达到分离；②等 密度沉降（isopycnic sedimentation）适用于分离密度不等的颗粒。细胞或细胞器 在连续梯度的介质中经足够大离心力和足够长时间则沉降或漂浮到与自身密度 相等的介质处，并停留在那里达到平衡，从而将不同密度的细胞或细胞器分离。 等密度沉降通常在较高密度的介质中进行。介质的最高密度应大于被分离组分的 最大密度。再者，这种方法所需要的力场通常比速度沉降法大10~100倍，故往往 需要高速或超速离心，离心时间也较长。大的离心力、长的离心时间都对细胞不 利。因此，这种方法适于分离细胞器，而不太适于分离和纯化细胞。 分离亚细胞组分的第三步是对分级分离得到的组分进行分析，以确认。常要 的分析方法包括形态和功能鉴定。 第二节 细胞核与线粒体的分级分离 一、所需试剂及设备 小白鼠、冰块、玻璃匀浆器、普通离心机、台式高速离心机、普通天平、光 学显微镜、载玻片、盖玻片、刻度离心管、高速离心管、滴管、10ml量筒、25m1 烧杯、玻璃漏斗、解剖剪、镊子、吸水纸、纱布、蜡盘、平皿、牙签。0.25moL/L 蔗糖一0.003mol/L CaCl2溶液、1%甲苯胺兰染液、0.02%詹纳斯绿B染液、 0.9%NaCl溶液