实验五菠菜色素的提取和分离 一.实验目的 1.通过绿色植物色素的提取和分离，了解天然物质分离提纯方法： 2.通过柱色谱和薄层色谱分离操作，加深了解微量有机物色谱分离鉴定的原理。 二，实验原理 绿色精物I菠菜叶中含有叶绿素（绿）、胡萝下素（橙）和叶黄素（黄）等多种天然色素。 叶绿素存在两种结构相似的形式即叶绿素a和叶绿素b。叶绿素a中一个甲基被醛基代替即叶绿 素b。它们都是吡咯衍尘物与金属镁的络合物，是植物进行光合作用所必需的催化剂。植物中叶绿素 的含量通常是叶绿素b的3倍。尽管叶绿素分子中含有一些极性基团，但大的烃基结构使它易溶于 乙醚、石油醚等一些非极性的溶剂。 胡萝卜素是具有长链结构的共轭多烯。它有二种异构体，即，B-和Y-胡萝卜素，其中B-异构体 含量最多，也最重要。在生物体内，B-体受酶催化氧化即形成维生素A。目前B-胡萝下素已可进行工 业生产，可作为维生素A使用，也可作为食品工业中的色素。 叶黄素是胡萝卜素的烃基衍生物，它在绿叶中的含量通常是胡萝卜素的两倍。与胡萝卜素相比， 叶黄素较易溶于醇而在石油醚中溶解度较小。 本实验从菠菜中提取上述几各色素，并通过薄层层祈和柱层析进行分离。 三.主要仪器与试剂 1.仪器：研钵，布氏漏斗，圆底烧瓶，直形冷凝管，层析缸。 2.试剂：硅胶G,中性氧化铝，甲醇，石油醚(60~90℃)，丙酮，乙酸乙脂，菠菜叶 四，实验步骤 1,菠菜色素的提取 称取10g洗净后的新鲜（或冷冻）的菠菜叶，用剪刀剪碎并与50mL甲醇拌匀，在研钵中研磨 5mn,然后用布氏漏斗油滤菠菜，弃去滤液。 将菠菜渣放回研钵，每次用500mL3:2(体积比)的石油醚一甲醇混合液提取两次，每次需加以研 磨并月抽滤。合并深绿色萃取液，转入分液漏斗，每次用25mL水洗涤两次，以除去萃取液中的甲酸。 洗涤时要轻轻旋荡，以防止产生乳化。弁去水一甲醇层，石油醚层用无水硫酸钠干燥后滤入圆底烧瓶， 在水浴上蒸去大部分石油醚全体积约为10mL为止。 2.薄层层析 取四块显微载玻片，用硅胶G加0.5%羟甲基纤维素调制后制板，晾干后在110℃活化1h 展开剂：(a)石油醚：丙酮=8：2（体积比） (b)石油醚：乙酸乙酯=6：4（体积比） 取活化后的层析板，点样后，小心放入预先加训入选定展开剂的层析缸内，盖好缸盖。待展开剂上 升全规定高度时，取出层析板，在空气中晾干，用铅笔做出标记，并进行测量，分别计算出R值。 分别用展开剂(a)和(b)展开。比较不同展开剂系统的展开效果。观察斑点在板上的位置并排 列出胡萝下素、叶绿素和叶黄素的R值的大小次序。注意史换展开剂时，须干燥层析缸。 3.杜层析 在层析柱中，加3℃m高的石油醚。另取少量脱脂棉，先在小烧杯用石油醚浸湿。挤压以驱除气泡， 然后放在层析柱底部。轻轻压紧，塞住底部。将3g层析用的中性氧化铝(150~160目)，从玻璃漏 斗中缓缓加入。小心打开柱下活塞，保持石油继高度不变，流下的氧化铝在柱子中堆积。必要时用橡 皮锤轻轻在层析柱的周围敲击，使吸附剂装得均匀致密。柱中溶剂面山下端活塞控制，既不能满溢， 史不能干涸。装完后，上面再加一片圆形滤纸，打开下端活塞，放出溶剂，直到氧化出表面溶剂剩下 1~2mm高时关上活塞（注意！在任何情况下，氧化铝表面不得露出液面）。 将上述菠菜色素的浓缩液，用滴管小心地加到层析柱顶部，加完后，打开下端活塞，让液面下降 到柱面以上1m左右，关闭活塞，加数滴石油醚，打开活塞，使液面下降，经几次反复，使色素全 5