l、DNA聚合反应必备的条件 (1)DNA聚合酶 (2)DNA模板(反转录时用RNA模板) (3)引物(DNA、RNA或蛋白质) (4)4种dNIP (5)Mg2+ 2、聚合反应过程及特点 总反应式 nIdAL DNA pol dAMP n2dGTP +dNA- dGmp DNA+ (nI+n2+n3+n4) PPi n3dCTP dCMP nadTTP d TMP P329图1910 P330图1911 在链的延长过程中,链的游离3-羟基,对进入的脱氧核糖核苷三磷酸α磷原子发生亲核攻击,生成35 磷酸二酯键,并脱下焦磷酸。 DNA聚合酶的反应特点 (1)以4种dNIP为底物 (2)反应需要接受模板的指导,不能催化游离的dNIP的聚合。 (3)反应需有引物3羟基存在 (4)链生长方向5→3 (5)产物DNA的性质与模板相同 3、由DNA聚合酶催化的几种DNA聚合类型 P331图1912 (1)发荚环结构:加入单链DNA作为模板和引物,3羟基端回折成引物链。 (2)末端延伸聚合:加入双链DNA作为模板和引物,3’末端突出作为模板。 (3)分枝型和切口平移型聚合:加入双链DNA,聚合发生在切口或末端单链区。 (4)环形聚合:加入带引物的环形DNA作为模板。 4、 E coli DNA聚合酶 (1) coli. DNA pol I ( Kornberg A, 400 copy/cell) 单体酶,分子量10Kd,含一个Zm2,每个细胞中含400个 DNA pol.I 催化活性: 5→3聚合活性 3→5外切活性４ 1、 DNA 聚合反应必备的条件 ⑴ DNA 聚合酶 ⑵ DNA 模板(反转录时用RNA模板) ⑶引物 (DNA、RNA或蛋白质) ⑷ 4 种 dNTP ⑸ Mg 2+ 2、 聚合反应过程及特点 总反应式： n1dATP DNA pol . dAMP n2dGTP +DNA dGMP DNA+（n1+n2+n3+n4）PPi n3dCTP Mg2+ dCMP n4dTTP dTMP P329 图 19-10 P330 图19-11 在链的延长过程中，链的游离 3 ， -羟基，对进入的脱氧核糖核苷三磷酸α磷原子发生亲核攻击，生成 3 ， .5， -磷酸二酯键，并脱下焦磷酸。 DNA 聚合酶的反应特点： ⑴ 以 4 种 dNTP 为底物 ⑵ 反应需要接受模板的指导，不能催化游离的dNTP 的聚合。 ⑶ 反应需有引物3 ， -羟基存在 ⑷ 链生长方向5 ， → 3 ， ⑸ 产物 DNA的性质与模板相同 3、 由 DNA聚合酶催化的几种DNA聚合类型 P331 图19-12 （1） 发荚环结构：加入单链DNA作为模板和引物，3 ＇羟基端回折成引物链。 （2） 末端延伸聚合：加入双链DNA 作为模板和引物，3’末端突出作为模板。 （3） 分枝型和切口平移型聚合：加入双链DNA，聚合发生在切口或末端单链区。 （4） 环形聚合：加入带引物的环形DNA 作为模板。 4、 E.coli DNA聚合酶 （1）、 E.coli. DNA pol.I（Kornberg 酶，400 copy/cell） 单体酶，分子量109Kd，含一个Zn 2+，每个细胞中含400 个DNA pol.Ⅰ 催化活性： 5 ， → 3 ， 聚合活性 3 ， → 5 ， 外切活性