5→3外切活性 用蛋白水解酶将 DNApol.I部分水解可得: 大片段( Klenow),75Kd,活性:53聚合活性、3→5·外切活性。 小片段,36Kd,活性:5→3′外切活性(只作用于双链DNA的碱基配对部分,切除修复)。 Klenow片段的用途: a补齐DNA3隐缩未端 b.标记DNA片段未端 c.cDNA合成第二链 d.dDNA测序 (2)、E.coli. dNA Pol.Ⅱ(100copy/cel1) 单体酶,分子量120Kd 催化活性:5→3聚合(活性很低) 3→5外切 可能在DNA的修复中起某中作用。 (3)、E. coli DNA polⅢ(复制酶,10-20copy/eell) 寡聚酶,全酶由10种共22个亚基组成,a、ε和θ三种亚基组成核心酶 P334表10-3 DNApⅢ是合成新链DNA主要的酶,又称复制( Replicase) PolI的5→3外切酶活性只作用于单链DNA P334表19-2 E coli三种DNA聚合酶的性质比较 ★DNA聚合酶有6个结合位点 (1)模板DNA结合位点 (2)引物结合位点 (3)引物3-OH位点、反应位点 (4)底物dNTP结合位点 (5)5→3外切位点pol没有) (6)3→5外切位点(校正) 5、真核生物DNA聚合酶 P334表194真核生物DNA聚合酶 真核DNA聚合酶一般不具备外切活力,可能由另外的酶在DNA复制中起校正功能。 (1)DNA聚合酶,多亚基,功能与 Ecoli. polII类似是真核DNA复制酶 (2)DNA聚合酶β,主要在DNA损伤的修复中起作用。５ 5 ， → 3 ， 外切活性 用蛋白水解酶将DNA pol.Ⅰ部分水解可得： 大片段（Klenow），75Kd，活性：5 ， → 3 ，聚合活性、3 ， → 5 ，外切活性。 小片段，36Kd，活性：5 ， → 3 ，外切活性（只作用于双链DNA 的碱基配对部分，切除修复）。 Klenow 片段的用途： a 补齐 DNA 3，隐缩未端 b. 标记 DNA片段未端 c．cDNA合成第二链 d．d DNA测序 （2）、 E.coli. DNA Pol.Ⅱ（100 copy/cell） 单体酶，分子量120Kd 催化活性：5 ，→ 3 ，聚合(活性很低) 3 ，→ 5 ，外切 可能在 DNA的修复中起某中作用。 （3）、 E.coli.DNA pol.Ⅲ（复制酶，10-20 copy/cell） 寡聚酶，全酶由10 种共22 个亚基组成，α、ε和θ三种亚基组成核心酶。 P334 表 10-3 DNA pol.Ⅲ是合成新链DNA 主要的酶，又称复制酶(Replicase) Pol.Ⅲ的5 ，→3 ，外切酶活性只作用于单链DNA。 P334 表 19-2 E.coli 三种DNA 聚合酶的性质比较 ★DNA聚合酶有6 个结合位点 ⑴ 模板 DNA 结合位点 ⑵ 引物结合位点 ⑶ 引物 3 ， -OH位点、反应位点 ⑷ 底物 dNTP 结合位点 ⑸ 5 ， → 3 ， 外切位点(pol.Ⅱ没有) ⑹ 3 ， → 5 ， 外切位点(校正) 5、 真核生物DNA聚合酶 P334 表 19-4 真核生物 DNA 聚合酶 真核 DNA 聚合酶一般不具备外切活力，可能由另外的酶在DNA复制中起校正功能。 ⑴ DNA 聚合酶α，多亚基，功能与E.coli. pol.Ⅲ类似，是真核DNA 复制酶。 ⑵ DNA 聚合酶β，主要在DNA损伤的修复中起作用