将菌株接种于合适斜面培养基上，待生长好后置于 4 冰箱保藏，每隔一定时间 进行移接培养后再将新斜面继续保藏。 这种保藏方法简单，存活率高，易于推广，经常使用的菌种可采用这种方法。 其缺点是菌种仍有一定强度的代谢活动条件，保存时间不长，而且传代多，因此菌 种客易产生变异。 （2）石蜡油封保藏法 将生长好的新鲜斜面在无菌条件下倒入已灭菌的液体石蜡，油层要高出斜面上 端 1cm，使之与空气隔绝，然后垂直放于室温或冰箱内保藏即可。 这种方法也比较简便，且保藏时间一般可长达 l 年以上。适于保存部分霉菌、 酵母菌、放线菌，但对细菌效果较差，对某些能同化烃类的微生物则不适用。 （3）砂土管保藏法 将孢子悬浮液转移至灭过菌的砂土管中，于真空干燥器内用真空泵抽干，再转 至有干燥剂的容器中，密封低温保藏。本方法是用人工方法模拟自然环境使菌种得 以栖息。适用于细菌的芽孢、霉菌和放线菌孢子的保藏，不适于对干燥敏感的无芽 孢的细菌和酵母菌。主要包括砂土制备和真空抽干两步。 （4）冷冻干燥法 此法的原理是在低温下迅速将细胞冻结以保持细胞结构的完整，然后在真空下 使水分升华。这样菌种的生长和代谢活动处于极低水平，不易发生变异和死亡，因 而能长期保存，一般为 5~10 年。微生物在此条件下易死亡，所以需加入一些物质 作保护剂，一般常用的是脱脂牛奶、血清等。该法存活率高，变异率低，并能广泛 适用于细菌（有芽孢和无芽孢的）、酵母、霉菌孢子、放线菌孢子和病毒等，因此是 目前广泛采用的好方法。其缺点是手续麻烦，操作复杂，要求严格，并需有一定设 备条件。 （5）超低温保藏法 由于现在超低温冰箱的使用已较普及，所以菌种的超低温保藏法在生产企业和 研究机构已得到广泛应用。该方法的要点是：将要保藏的菌种置于 10%甘油或二甲 基亚砜保护剂中，密封于试管或安瓿管中，然后将其放入超低温冰箱中于-70℃下保 藏。该法简便易行，而且保藏效果较好。 二、发酵工业微生物菌种的衰退与复壮 微生物具有生命活动能力，其世代时间一般是很短的，在传代过程中易发生变 异甚至死亡，因此常常造成工业生产菌种的退化，并有可能使优良菌种丢失，所以， 如何保持菌种优良性状的稳定是研究菌种保藏的重要课题。将菌株接种于合适斜面培养基上，待生长好后置于 4 冰箱保藏，每隔一定时间 进行移接培养后再将新斜面继续保藏。 这种保藏方法简单，存活率高，易于推广，经常使用的菌种可采用这种方法。 其缺点是菌种仍有一定强度的代谢活动条件，保存时间不长，而且传代多，因此菌 种客易产生变异。 （2）石蜡油封保藏法 将生长好的新鲜斜面在无菌条件下倒入已灭菌的液体石蜡，油层要高出斜面上 端 1cm，使之与空气隔绝，然后垂直放于室温或冰箱内保藏即可。 这种方法也比较简便，且保藏时间一般可长达 l 年以上。适于保存部分霉菌、 酵母菌、放线菌，但对细菌效果较差，对某些能同化烃类的微生物则不适用。 （3）砂土管保藏法 将孢子悬浮液转移至灭过菌的砂土管中，于真空干燥器内用真空泵抽干，再转 至有干燥剂的容器中，密封低温保藏。本方法是用人工方法模拟自然环境使菌种得 以栖息。适用于细菌的芽孢、霉菌和放线菌孢子的保藏，不适于对干燥敏感的无芽 孢的细菌和酵母菌。主要包括砂土制备和真空抽干两步。 （4）冷冻干燥法 此法的原理是在低温下迅速将细胞冻结以保持细胞结构的完整，然后在真空下 使水分升华。这样菌种的生长和代谢活动处于极低水平，不易发生变异和死亡，因 而能长期保存，一般为 5~10 年。微生物在此条件下易死亡，所以需加入一些物质 作保护剂，一般常用的是脱脂牛奶、血清等。该法存活率高，变异率低，并能广泛 适用于细菌（有芽孢和无芽孢的）、酵母、霉菌孢子、放线菌孢子和病毒等，因此是 目前广泛采用的好方法。其缺点是手续麻烦，操作复杂，要求严格，并需有一定设 备条件。 （5）超低温保藏法 由于现在超低温冰箱的使用已较普及，所以菌种的超低温保藏法在生产企业和 研究机构已得到广泛应用。该方法的要点是：将要保藏的菌种置于 10%甘油或二甲 基亚砜保护剂中，密封于试管或安瓿管中，然后将其放入超低温冰箱中于-70℃下保 藏。该法简便易行，而且保藏效果较好。 二、发酵工业微生物菌种的衰退与复壮 微生物具有生命活动能力，其世代时间一般是很短的，在传代过程中易发生变 异甚至死亡，因此常常造成工业生产菌种的退化，并有可能使优良菌种丢失，所以， 如何保持菌种优良性状的稳定是研究菌种保藏的重要课题