只有2nm。因此DNA溶液的粘度极高。RNA溶液的粘度要小得多。 3.沉降特性 溶液中的核酸分子在引力场中可以下沉。不同构象的核酸(线形、开环、超螺旋结构), 蛋白质及其他杂质,在超离心机的强大引力场中,沉降的速率有很大差异,所以可以用超 离心法纯化核酸或将不同构象的核酸进行分离,也可以测定核酸的沉降常数与分子量。 用不同介质组成密度梯度进行超离心分离核酸时,效果较好。RNA分离常用蔗糖梯度。 分离DNA时用得最多的是氯化铯梯度。氯化铯在水中有很大溶解度,可以制成浓度很高 (80mol/L)的溶液 应用啡淀嗅红一氯化铯密度梯度平衡超离心,很容易将 不同构象的DNA、RNA及蛋白质分开。这个方法是目前实 石蜡油 验室中纯化质粒DNA时最常用的方法。如果应用垂直转头, 每分钟65000( Beckman L70超离心机),只要6h就可以蛋白质 完成分离工作。但是如果采用角转头,转速为每分钟45000开环形及 时,则需36h。离心完毕后,离心管中各种成分的分布可以 在紫外光照射下显示得一清二楚(如图410.蛋白质漂浮 在最上面,RNA沉淀在底部。超螺旋DNA沉降较快,开环 及线形DNA沉降较慢。用注射针头从离心管侧面在超螺旋 RNA DNA区带部位刺入,收集这一区带的DNA。用异戊醇抽提 攸集到的DNA以除去染料,然后透析除去CsCl,再用苯酚 抽提1~2次,即可用乙醇将DNA沉淀出来。这样得到的 DNA有很高的纯度,可供DNA重组、测定序列及限制酶图图410经染料一氯化铯密 谱等之用。在少数情况下,需要特别纯的DNA时,可以将度超离心后,质粒DNA及 此DNA样品再进行一次氯化铯密度梯度超离心分离。 各种杂质的分布 、凝胶电泳 凝胶电泳可算是当前核酸硏究中最常用的方法了。它有简单、快速、灵敏、成本低等优 点。常用的凝胶电泳有琼脂糖( agarose)凝胶电泳和聚丙烯酰胺( polyacrylamide)凝胶电泳 凝胶电泳可以在水平或垂直的电泳槽中进行。凝胶电泳兼有分子筛和电泳双重效果,所以分 离效率很高。 1.琼脂糖凝胶电泳 以琼脂糖为支持物,电泳的迁移率决定于以下因素 (1)核酸分子大小迁移率与分子量对数成反比 (2)胶浓度迁移率与胶浓度成反比,常用1%的胶分离DNA (3)DNA的构象一般条件下超螺旋DNA的迁移率最快,线形DNA其次,开环形 最慢。但在胶中加入过多的啡啶溴红时,上述分布次序会发生改变 (4)电流一般不大于5V/m。有适当的电压差时,迁移率与电流大小成正比－89－ 只有 2nm。因此 DNA 溶液的粘度极高。RNA 溶液的粘度要小得多。 3．沉降特性 溶液中的核酸分子在引力场中可以下沉。不同构象的核酸（线形、开环、超螺旋结构）， 蛋白质及其他杂质，在超离心机的强大引力场中，沉降的速率有很大差异，所以可以用超 离心法纯化核酸或将不同构象的核酸进行分离，也可以测定核酸的沉降常数与分子量。 用不同介质组成密度梯度进行超离心分离核酸时，效果较好。RNA 分离常用蔗糖梯度。 分离 DNA 时用得最多的是氯化铯梯度。氯化铯在水中有很大溶解度，可以制成浓度很高 （80mol／L）的溶液。 应用啡淀嗅红—氯化铯密度梯度平衡超离心，很容易将 不同构象的 DNA、RNA 及蛋白质分开。这个方法是目前实 验室中纯化质粒 DNA时最常用的方法。如果应用垂直转头， 每分钟 65 000r（Beckman L-70 超离心机），只要 6h 就可以 完成分离工作。但是如果采用角转头，转速为每分钟 45 000r 时，则需 36h。离心完毕后，离心管中各种成分的分布可以 在紫外光照射下显示得一清二楚（如图 4-10）。蛋白质漂浮 在最上面，RNA沉淀在底部。超螺旋 DNA 沉降较快，开环 及线形 DNA 沉降较慢。用注射针头从离心管侧面在超螺旋 DNA 区带部位刺入，收集这一区带的 DNA。用异戊醇抽提 收集到的 DNA 以除去染料，然后透析除去 CsCl，再用苯酚 抽提 1～2 次，即可用乙醇将 DNA 沉淀出来。这样得到的 DNA 有很高的纯度，可供 DNA 重组、测定序列及限制酶图 谱等之用。在少数情况下，需要特别纯的 DNA 时，可以将 此 DNA 样品再进行一次氯化铯密度梯度超离心分离。 二、凝胶电泳 凝胶电泳可算是当前核酸研究中最常用的方法了。它有简单、快速、灵敏、成本低等优 点。常用的凝胶电泳有琼脂糖（agarose）凝胶电泳和聚丙烯酰胺（polyacrylamide）凝胶电泳。 凝胶电泳可以在水平或垂直的电泳槽中进行。凝胶电泳兼有分子筛和电泳双重效果，所以分 离效率很高。 1．琼脂糖凝胶电泳 以琼脂糖为支持物，电泳的迁移率决定于以下因素： （1）核酸分子大小 迁移率与分子量对数成反比； （2）胶浓度 迁移率与胶浓度成反比，常用 1％的胶分离 DNA； （3）DNA 的构象 一般条件下超螺旋 DNA 的迁移率最快，线形 DNA 其次，开环形 最慢。但在胶中加入过多的啡啶溴红时，上述分布次序会发生改变； （4）电流 一般不大于 5V/cm。有适当的电压差时，迁移率与电流大小成正比； 图 4-10 经染料—氯化铯密 度超离心后，质粒 DNA 及 各种杂质的分布