以达到HLA抗原分型的目的。HLA分型过去主要采取血清学和细胞 学的方法。近十几年来,HA的DNA分型方法迅速发展,成为一种 全新的方法,该方法准确、灵敏,并且能够检测出传统方法无法检出 的类型。随着分子生物学手段的普及应用,该技术日趋完善,并在其 他领域如肿瘤学等得到广泛应用。 能够检测DNA分子结构差异的技术都可以用于HLA分型,有关 分型技术可参阅本书第18章 以HLA-Ⅰ类抗原的分型方法为例,血清学检测有3个明显的不 足:①随着新的等位基因特异性被发现,血清学方法难以获得相应的 标准抗血清;⑧较多的交叉反应使亚型分辨困难;③标准血清的筛选 技术复杂、难度大,至今C位点的血清学分型缺乏理想的试剂。对于 大多数HLA-A位点来说,血清学分型有较理想的结果。但自第九届 组织相容性会议确认A33,A34,A36,A43,A66,A68和A69的特 异性,此后A74和A80的特异性又被分辨出来,但血清学至今尚无 理想的单特异性分型试剂。因此,近年对A位点的分型开始由血清学 转入DNA分型。 Bozon采用二步法SsP(特异引物聚合酶链反应) 并与SSOP(寡核苷酸探针杂交)比较,可分辨出所有A位点的等位 基因,分型结果明显优于血清学方法。 Blasczyk采用SSP结合测序和 SSCP(单链构像多态性)分析48份细胞株和153份样本,结果表明 所有A位点亚型均可准确分辨出来,重复率100%在所有A1-A80 可能的231种组合中,除13种外,全部可分辨出来。采用固相测序 和SSCP分析可分辨出所有A位点的48个等位基因,在总计1128种 A位点等位基因组合中,只有4种需要重复 Bunce采用188个引物组成144个PCR反应建立一步法SSP用于 所有Ⅰ类和Ⅱ类抗原DNA分型,扩增在同一条件下进行,借助常规 琼脂糖凝胶电泳,可在3小时内完成分型。可分辨的等位基因包括A 位点20个、B位点42个、C位点14个、DRBl位点15个、DRB3、 DRB4、DRB5共7个和DQB1位点5个,总计达102个。不但分辨 率高于血清学方法,分型时间快速,适合于尸体移植快速配型的需要, 还可分辨出4个新的B位点等位基因。经过9个月对1010份临床样以达到 HLA 抗原分型的目的。HLA 分型过去主要采取血清学和细胞 学的方法。近十几年来，HLA 的 DNA 分型方法迅速发展，成为一种 全新的方法，该方法准确、灵敏，并且能够检测出传统方法无法检出 的类型。随着分子生物学手段的普及应用，该技术日趋完善，并在其 他领域如肿瘤学等得到广泛应用。 能够检测 DNA 分子结构差异的技术都可以用于 HLA 分型，有关 分型技术可参阅本书第 18 章。 以 HLA-Ⅰ类抗原的分型方法为例，血清学检测有 3 个明显的不 足：①随着新的等位基因特异性被发现，血清学方法难以获得相应的 标准抗血清；⑧较多的交叉反应使亚型分辨困难；③标准血清的筛选 技术复杂、难度大，至今 C 位点的血清学分型缺乏理想的试剂。对于 大多数 HLA-A 位点来说，血清学分型有较理想的结果。但自第九届 组织相容性会议确认 A33，A34，A36，A43，A66，A68 和 A69 的特 异性，此后 A74 和 A80 的特异性又被分辨出来，但血清学至今尚无 理想的单特异性分型试剂。因此，近年对 A 位点的分型开始由血清学 转入 DNA 分型。Bozon 采用二步法 SSP（特异引物聚合酶链反应） 并与 SSOP（寡核苷酸探针杂交）比较，可分辨出所有 A 位点的等位 基因，分型结果明显优于血清学方法。Blasczyk 采用 SSP 结合测序和 SSCP（单链构像多态性）分析 48 份细胞株和 153 份样本，结果表明 所有 A 位点亚型均可准确分辨出来，重复率 100％。在所有 A1-A80 可能的 231 种组合中，除 13 种外，全部可分辨出来。采用固相测序 和 SSCP 分析可分辨出所有 A 位点的 48 个等位基因，在总计 1128 种 A 位点等位基因组合中，只有 4 种需要重复。 Bunce 采用188 个引物组成144 个 PCR 反应建立一步法SSP 用于 所有Ⅰ类和Ⅱ类抗原 DNA 分型，扩增在同一条件下进行，借助常规 琼脂糖凝胶电泳，可在 3 小时内完成分型。可分辨的等位基因包括 A 位点 20 个、B 位点 42 个、C 位点 14 个、DRB1 位点 15 个、DRB3、 DRB4、DRB5 共 7 个和 DQB1 位点 5 个，总计达 102 个。不但分辨 率高于血清学方法，分型时间快速，适合于尸体移植快速配型的需要， 还可分辨出 4 个新的 B 位点等位基因。经过 9 个月对 1010 份临床样