持续了几百年。几百年来,临床上有人禀承丹溪学说,也有人推衷景岳学说,没有定论。 当现代临床实验研究方法引入中医临床观察以后,发现同样是老年人,激素水平、神经 递质水平存在显著差别,这些递质、激素在部分人群当中可以长期维持在一个较高的水平, 而部分人群随着衰老则明显下降。其中,这些年大量实验研究所观察到的与寒证、热证有明 显关系的儿茶酚胺类递质在老年人中波动就很大。我们采用动物实验研究中药二仙汤及其寒 两个拆方的作用机理时发现,温肾药对老年和去势大鼠下丘脑-垂体-性腺(去势动物观察 肾上腺)轴兴奋作用突出,而滋阴泻火药对这些轴的延缓衰老和保护作用突出,部分揭示出 寒、温治法的差别。联系到临床硏究结果,显然,对那些激素、神经递质水平髙、热象明显 的老年人,补肾以偏重于滋阴泻火为妥:而对于那些激素、神经递质水平低、寒象明显的老 人,补肾以偏重于温肾壮阳为妥。这些中医基础理论研究丰富了中医学延缓衰老的理论和 方法,对临床上延缓衰老的辨证论治起到了积极的指导作用。 生物医学研究表明,生殖的发生和衰老与下丘脑垂体-性腺轴的发育成熟和衰老有关 在下丘脑水平,促性腺激素释放激素(GnRH)释放的一定数量和频率对于保持正常生殖能 力是十分必要的。GnRH是由下丘脑位于弓状核和视前区的GnRH神经元所分泌。为了进 步了解二仙汤的作用机制,我们采用了分子生物学实验技术观察了二仙汤对老年大鼠下丘脑、 垂体GnRH含量的变化。研究发现,24月龄老年大鼠下丘脑 gnrH mRNA含量( Northern blot) 较5月龄青年大鼠下降、垂体GnRH(下丘脑合成的GnRH通过垂体门脉系统直接释放到垂 体)含量也下降:而经过二仙汤的治疗,同龄老年大鼠下丘脑 gnrh mRNA含量、垂体GnRH 含量较老年对照大鼠增加,表明二仙汤治疗更年期综合征取效的部分机制与该处方延缓下丘 脑GnRH神经元的衰老,并增进其功能有关。上海第二医科大学进而采用细胞生物学的研究 方法,发现与若干常用经典温肾中药复方相比,二仙汤能使GnRH细胞系GT1-7的GnRH分 必峰提前,并维持时间最长。这些研究采用了细胞生物学和分子生物学技术加深了我们对中 药复方作用机制的认识。如果不借助分子生物学、细胞生物学的技术和方法,我们便难以高 效、准确、深入地观察到中药复方作用的分子机制,也就无从开展更进一步的深入研究,并 在此基础上发展和丰富中医药学。 医学和生命学科的研究探索是没有止境的。近十年来所采用的分子生物学技术研究表 GnRH基因有3000bp左右的启动子,在这些启动子上一些区域在特定的细胞系中对于 GnRH基因的高表达十分重要,被称之为增强子。GnRH细胞在胚胎初始由鼻小坑向下丘脑 迁徙,并逐步分化成熟。研究发现来源于不同部位的GnRH细胞系,对GnRH的表达数量有 着很大的区别,比如GT1-7(来源于发生在前脑的肿瘤,接近GnRH细胞迁徙的终点)可以 高表达GnRH,而Gn10(来源于 GnRH细胞迁徙途中的肿瘤)则GnRH表达甚微。鉴此, 研究人员推测两个细胞系中调节GnRH基因启动子的核蛋白构成会有所不同,由于这些核蛋 白的构成不同,导致两个细胞系GnRH表达的多寡。我们采用分子生物学足迹法( Footprint) 技术发现,来源于GT1-7和Gn10两个细胞系的核蛋白在GnRH启动子,尤其是其增强子上 结合的数量以及所结合的DNA序列确实有所异同,可以推测,这些不同的结合蛋白可能是 调节GnRH表达数量多寡的重要蛋白,由此也提示两个细胞系中基因的表达有所差异。 我们采用另一项新近发展起来的 DDPCR技术进一步研究证实,GT1-7和Gn10两个细 胞系中确实有许多基因表达不同,有的是仅仅在其中一个细胞系中表达,而另一细胞系中阙 如:大多基因在两个细胞系中表达的数量明显不同。在这些差异表达的基因中,有一个基因 产物称之为Ark,仅仅在Gn10中表达,之前的研究表明Ak是一个跨膜蛋白,但是采用报 道基因技术研究发现,一旦使Ark基因在GT1-7细胞中表达增加,便会明显地抑制GnRH基 因的表达。该现象不但新观察到Ark的新功能,同时也提示同一基因产物在细胞中可能存在 的多功能。我们进一步采用 CDNA Array研究发现,有许多基因在GT-7和Gn0两个GnRH 细胞系中表达差异。其中哪些基因,或哪些基因组合对GnRH表达多寡会发生作用,目前尚 不清楚,研究正在进行之中。这些研究已经是GnRH研究的国际前沿工作。 那么我们自然要问,中药复方和其它中医药治法,比如二仙汤是否对以上这些调节 GnRH表达的基因产物发生影响,影响了哪些,是哪些中药有效部位或有效成分所起的作用, 这些有效成分的量效关系如何,有没有最佳的组合,与已知西药的作用异同如何,等等。这 样的研究势将把中医药延缓衰老的研究引向深入 以上研究揭示出单一细胞内生物调控现象的混沌复杂,而位于组织和机体中的细胞还受 到周边细胞、组织、其它系统的影响,因而变化就更复杂、更微妙,这就在细胞、分子水平持续了几百年。几百年来，临床上有人禀承丹溪学说，也有人推衷景岳学说，没有定论。 当现代临床实验研究方法引入中医临床观察以后，发现同样是老年人，激素水平、神经 递质水平存在显著差别，这些递质、激素在部分人群当中可以长期维持在一个较高的水平， 而部分人群随着衰老则明显下降。其中，这些年大量实验研究所观察到的与寒证、热证有明 显关系的儿茶酚胺类递质在老年人中波动就很大。我们采用动物实验研究中药二仙汤及其寒 温两个拆方的作用机理时发现，温肾药对老年和去势大鼠下丘脑-垂体-性腺（去势动物观察 肾上腺）轴兴奋作用突出，而滋阴泻火药对这些轴的延缓衰老和保护作用突出，部分揭示出 寒、温治法的差别。联系到临床研究结果，显然，对那些激素、神经递质水平高、热象明显 的老年人，补肾以偏重于滋阴泻火为妥；而对于那些激素、神经递质水平低、寒象明显的老 年人，补肾以偏重于温肾壮阳为妥。这些中医基础理论研究丰富了中医学延缓衰老的理论和 方法，对临床上延缓衰老的辨证论治起到了积极的指导作用。 生物医学研究表明，生殖的发生和衰老与下丘脑-垂体-性腺轴的发育成熟和衰老有关。 在下丘脑水平，促性腺激素释放激素（GnRH）释放的一定数量和频率对于保持正常生殖能 力是十分必要的。GnRH 是由下丘脑位于弓状核和视前区的 GnRH 神经元所分泌。为了进一 步了解二仙汤的作用机制，我们采用了分子生物学实验技术观察了二仙汤对老年大鼠下丘脑、 垂体 GnRH 含量的变化。研究发现，24 月龄老年大鼠下丘脑 GnRH mRNA 含量（Northern blot） 较 5 月龄青年大鼠下降、垂体 GnRH（下丘脑合成的 GnRH 通过垂体门脉系统直接释放到垂 体）含量也下降；而经过二仙汤的治疗，同龄老年大鼠下丘脑 GnRH mRNA 含量、垂体 GnRH 含量较老年对照大鼠增加，表明二仙汤治疗更年期综合征取效的部分机制与该处方延缓下丘 脑 GnRH 神经元的衰老，并增进其功能有关。上海第二医科大学进而采用细胞生物学的研究 方法，发现与若干常用经典温肾中药复方相比，二仙汤能使 GnRH 细胞系 GT1-7 的 GnRH 分 泌峰提前，并维持时间最长。这些研究采用了细胞生物学和分子生物学技术加深了我们对中 药复方作用机制的认识。如果不借助分子生物学、细胞生物学的技术和方法，我们便难以高 效、准确、深入地观察到中药复方作用的分子机制，也就无从开展更进一步的深入研究，并 在此基础上发展和丰富中医药学。 医学和生命学科的研究探索是没有止境的。近十年来所采用的分子生物学技术研究表 明，GnRH 基因有 3000bp 左右的启动子，在这些启动子上一些区域在特定的细胞系中对于 GnRH 基因的高表达十分重要，被称之为增强子。GnRH 细胞在胚胎初始由鼻小坑向下丘脑 迁徙，并逐步分化成熟。研究发现来源于不同部位的 GnRH 细胞系，对 GnRH 的表达数量有 着很大的区别，比如 GT1-7（来源于发生在前脑的肿瘤，接近 GnRH 细胞迁徙的终点）可以 高表达 GnRH，而 Gn10（来源于 GnRH 细胞迁徙途中的肿瘤）则 GnRH 表达甚微。鉴此， 研究人员推测两个细胞系中调节 GnRH 基因启动子的核蛋白构成会有所不同，由于这些核蛋 白的构成不同，导致两个细胞系 GnRH 表达的多寡。我们采用分子生物学足迹法（Footprint） 技术发现，来源于 GT1-7 和 Gn10 两个细胞系的核蛋白在 GnRH 启动子，尤其是其增强子上 结合的数量以及所结合的 DNA 序列确实有所异同，可以推测，这些不同的结合蛋白可能是 调节 GnRH 表达数量多寡的重要蛋白，由此也提示两个细胞系中基因的表达有所差异。 我们采用另一项新近发展起来的 DDPCR 技术进一步研究证实，GT1-7 和 Gn10 两个细 胞系中确实有许多基因表达不同，有的是仅仅在其中一个细胞系中表达，而另一细胞系中阙 如；大多基因在两个细胞系中表达的数量明显不同。在这些差异表达的基因中，有一个基因 产物称之为 Ark，仅仅在 Gn10 中表达，之前的研究表明 Ark 是一个跨膜蛋白，但是采用报 道基因技术研究发现，一旦使 Ark 基因在 GT1-7 细胞中表达增加，便会明显地抑制 GnRH 基 因的表达。该现象不但新观察到 Ark 的新功能，同时也提示同一基因产物在细胞中可能存在 的多功能。我们进一步采用 cDNA Array 研究发现，有许多基因在 GT1-7 和 Gn10 两个 GnRH 细胞系中表达差异。其中哪些基因，或哪些基因组合对 GnRH 表达多寡会发生作用，目前尚 不清楚，研究正在进行之中。这些研究已经是 GnRH 研究的国际前沿工作。 那么我们自然要问，中药复方和其它中医药治法，比如二仙汤是否对以上这些调节 GnRH 表达的基因产物发生影响，影响了哪些，是哪些中药有效部位或有效成分所起的作用， 这些有效成分的量效关系如何，有没有最佳的组合，与已知西药的作用异同如何，等等。这 样的研究势将把中医药延缓衰老的研究引向深入。 以上研究揭示出单一细胞内生物调控现象的混沌复杂，而位于组织和机体中的细胞还受 到周边细胞、组织、其它系统的影响，因而变化就更复杂、更微妙，这就在细胞、分子水平