15于给药后5min、15min、25min、35min、45min、1h、2h、3h、4h、5h、6h用12号针 头自另一侧耳缘静脉采血1-1.5m,血标本均用肝素抗凝。 16分离血浆(3000r·minl,l0min)至另一试管,于-20℃保存,直至测定。 2血药浓度测定(紫外分光光度法) 2.1硫喷妥钠标准溶液的配制 精密称取硫喷妥钠对照品100mg,用蒸馏水适量溶解,移入100ml容量瓶中,加水至 刻度,摇匀,得1mg·ml浓度的标准储备液,取储备液配制成3.125、625、12.5、25.0 500、1000、2000μg·mll的硫喷妥钠标准溶液 22标准曲线的制备 精密称取3.125、625、12.5、250、50.0、1000、2000μg·m1的硫喷妥钠标准溶液 0.lml,分置lom具塞试管中,加入0.45 molr-氢氧化钠溶液4ml,混匀。用045moll氢 氧化钠溶液为参比,以lcm吸收池,于大约304nm波长处测定各管的吸光度,以硫喷妥钠 C为横坐标,吸光度A为纵坐标,求得线性回归方程。 23血浆标准曲线的制备 取空白血浆7份分置10ml具塞试管中,分别加入浓度为3.125、6,25、125、250、50.0 1000、2000μg·m的硫喷妥钠标准溶液0.lm,每份用二氯甲烷4m和3ml萃取两次 (旋涡混合提取2min),离心(3000r·minl,10min),合并萃取液6ml。向萃取液中加入 045moll-氢氧化钠溶液4ml,混匀(旋涡混合30s),离心(3000r·min1,10min),抽取 氢氧化钠层供测定。余同标准曲线制备项下。以硫喷妥钠C为横坐标,吸光度A为纵坐标, 求得线性回归方程 24回收率和精密度实验 分别取空白血浆0.5m,精密加入不同浓度的硫喷妥钠标准溶液,使其血浆浓度分别为 625、25.0、1000ug·m1。余同标准曲线制备项下。于1日内5次和连续5日内分别考察 其回收率和日内、日间变异结果。 2.5血浆样品测定 取血浆o.lml,每份用二氯甲烷4ml和3ml萃取两次(旋涡混合提取2min),离心 (3000r·min2, 10min),合并萃取液6ml。向萃取液中加入045mol氢氧化钠溶液4ml, 混匀(旋涡混合30s),离心(3000r·min,l0min),抽取氢氧化钠层供测定。用omin管 为参比,以lcm吸收池,于大约304nm波长处测定各管的吸光度1.5 于给药后 5min、15 min、25 min、35min、45 min、1h、2h、3h、4h、5h、6h 用 12 号针 头自另一侧耳缘静脉采血 1-1.5ml，血标本均用肝素抗凝。 1.6 分离血浆（3000r·min-1，10min）至另一试管，于-20℃保存，直至测定。 2 血药浓度测定（紫外分光光度法） 2.1 硫喷妥钠标准溶液的配制 精密称取硫喷妥钠对照品 100mg，用蒸馏水适量溶解，移入 100ml 容量瓶中，加水至 刻度，摇匀，得 1 mg·ml-1 浓度的标准储备液，取储备液配制成 3.125、6.25、12.5、25.0、 50.0、100.0、200.0 μg·ml- 1 的硫喷妥钠标准溶液。 2.2 标准曲线的制备 精密称取 3.125、6.25、12.5、25.0、50.0、100.0、200.0 μg·ml- 1 的硫喷妥钠标准溶液 0.1ml，分置 10ml 具塞试管中，加入 0.45mol•l -1 氢氧化钠溶液 4ml，混匀。用 0.45mol•l -1 氢 氧化钠溶液为参比，以 1cm 吸收池，于大约 304nm 波长处测定各管的吸光度，以硫喷妥钠 C 为横坐标，吸光度 A 为纵坐标，求得线性回归方程。 2.3 血浆标准曲线的制备 取空白血浆 7 份分置 10ml 具塞试管中，分别加入浓度为 3.125、6.25、12.5、25.0、50.0、 100.0、200.0 μg·ml- 1 的硫喷妥钠标准溶液 0.1ml，每份用二氯甲烷 4ml 和 3ml 萃取两次 （旋涡混合提取 2min），离心（3000r·min-1，10min），合并萃取液 6ml。向萃取液中加入 0.45mol•l -1 氢氧化钠溶液 4ml，混匀（旋涡混合 30s），离心（3000r·min-1，10min），抽取 氢氧化钠层供测定。余同标准曲线制备项下。以硫喷妥钠 C 为横坐标，吸光度 A 为纵坐标， 求得线性回归方程。 2.4 回收率和精密度实验 分别取空白血浆 0.5ml，精密加入不同浓度的硫喷妥钠标准溶液，使其血浆浓度分别为 6.25、25.0、100.0μg·ml- 1。余同标准曲线制备项下。于 1 日内 5 次和连续 5 日内分别考察 其回收率和日内、日间变异结果。 2.5 血浆样品测定 取血浆 0.1ml，每份用二氯甲烷 4ml 和 3ml 萃取两次（旋涡混合提取 2min），离心 （3000r·min-1，10min），合并萃取液 6ml。向萃取液中加入 0.45mol•l -1 氢氧化钠溶液 4ml， 混匀（旋涡混合 30s），离心（3000r·min-1，10min），抽取氢氧化钠层供测定。用 0min 管 为参比，以 1cm 吸收池，于大约 304nm 波长处测定各管的吸光度