实验三酵母RNA的提制（浓盐法） 一、目的 学习和掌握从酵母中提制RNA的原理和方法，以加深对核酸性质的认识。 二、原理 酵母含RNA2.67%~10.0% ,DNA很少(0.03%~0.516%)，而且菌体容易收集，RNA 也易于分离，所以选用酵母为实验材料 RNA提制过程是先使NA从细胞中释放，并使它和蛋白质分离，然后将菌体除去。再 根据核酸在等电点时溶解度最小的性质，将pH调至2.0一2.5，使RNA沉淀，进行离心收 集。 提取RNA的方法很多，在工业生产上常用的是稀碱法和浓盐法 。前者利用稀碱溶解细 胞 ,使RNA释放出米， 这种方法提取时间短，但RNA在此条件下不稳定， 容易分解 者在加热的条件下，利用高浓度的盐改变细胞膜的透性，使RNA释放出来，此法易掌握， 产品颜色较好。 三、仪器、试剂和材料 1.仪器 (1)量筒(50ml) (2)三角瓶(100ml) (3)烧杯(250ml,50ml,10ml) (4)布氏漏斗(40mm) (5)吸滤瓶(125ml） (6)表面皿(6cm (7)751型分光光度计 (8)离心机(4000r/min) (9)恒温水浴 (10)药物天平 (11)烘箱 2.试剂 (I)NaCI(化学纯) (2)6mol LHCI )95%乙醇（化学纯） 3.材料 鲜酵母或干酵母：pH0.5~5.0的精密试纸 四、操作步骤 1.提取 称取鲜酵母159或干酵母粉2.5g,倒入100ml三角瓶中，加NaC12.5g,水25ml,搅 拌均匀，置于沸水浴中提取h 2.分离 将上述提取液用自来水冷却后，装入大离心管内，以4000r/min离心10min,使提取 液与菌体残渣等分离。 实验三 酵母 RNA 的提制（浓盐法） 一、目的 学习和掌握从酵母中提制 RNA 的原理和方法，以加深对核酸性质的认识。 二、原理 酵母含 RNA 2.67％～10.0％，DNA 很少（0.03％～0.516％），而且菌体容易收集，RNA 也易于分离，所以选用酵母为实验材料。 RNA 提制过程是先使 RNA 从细胞中释放，并使它和蛋白质分离，然后将菌体除去。再 根据核酸在等电点时溶解度最小的性质，将 pH 调至 2.0～2.5，使 RNA 沉淀，进行离心收 集。 提取 RNA 的方法很多，在工业生产上常用的是稀碱法和浓盐法。前者利用稀碱溶解细 胞壁，使 RNA 释放出来，这种方法提取时间短，但 RNA 在此条件下不稳定，容易分解； 后者在加热的条件下，利用高浓度的盐改变细胞膜的透性，使 RNA 释放出来，此法易掌握， 产品颜色较好。 三、仪器、试剂和材料 1．仪器 （1）量筒（50ml） （2）三角瓶（100ml） （3）烧杯（250ml，50ml，10ml） （4）布氏漏斗（40mm） （5）吸滤瓶（125ml） （6）表面皿（6cm） （7）751 型分光光度计 （8）离心机（4000r／min） （9）恒温水浴 （10）药物天平 （11）烘箱 2．试剂 （l）NaCl（化学纯） （2）6mol／L HCI （3）95％乙醇（化学纯） 3．材料 鲜酵母或干酵母；pHO.5～5.0 的精密试纸。 四、操作步骤 1．提取 称取鲜酵母 159 或干酵母粉 2.5g，倒入 100ml 三角瓶中，加 NaCl 2.5g，水 25ml，搅 拌均匀，置于沸水浴中提取 lh。 2．分离 将上述提取液用自来水冷却后，装入大离心管内，以 4000r／min 离心 10min，使提取 液与菌体残渣等分离