3.沉淀RNA 将离心得到的上清液顿于50ml烧杯内，并置入放有冰块的250ml烧杯中冷却.待冷 至10℃以下时，用6mol/LHCI小心地调节pH值至20~2.5（注意严格控制pH)。调好 后继续于冰水中静置10min,使沉淀充分，颗粒变大. 4.洗涤和抽滤 上述悬浮液以400Or/min离心1Omin,得到RNA沉淀。将沉淀物放在10ml小烧 杯内，用95%的乙醇5一10ml充分搅拌洗涤，然后在布氏漏斗上用射水泵抽气过滤，再用 95 乙醇5 10ml淋洗3次 5.干燥 从布氏漏斗上取下沉淀物，放在6cm表面皿上，铺成薄层，置于80℃烘箱内干燥。将 干燥后的RNA制品称重，存放于干燥器内。 6.含量测定 干燥后RNA产品配制成浓度为 50pg ml的溶液，在751型分光光度 计上测定其260nm处的吸光度，按下式计算RNA含量： RNA含量(%)=O.2XL×R最积x10 五、结果处理 根据含量测定的结果按下式计算提取率 RA提取率(%)=山金量制晶重凤x10m 六、注意事项 1.用浓盐法提取RNA时应注意掌握温度，避免在20~27℃之间停留时间过长，因为 这是磷酸二酯酶和碳酸单酯酶作用活跃的温度范围，会使RNA降解而降低提取率。 2.加热至90~1O0C使蛋白质变性，破坏两类磷酸酯酶，有利于RNA的提取 七、思考题 1.沉淀RNA之前为什么要冷却上清液至I0C以下？ 2.为什么要将pH调至2.0~2.5？ 参考文献 文树基。主编基础生物化学实验指导.西安：陕西科学技术出版社，1994 西北农业大学主编基础生物化学实验指导。西安：陕西科学技术出版社，1986 袁玉苏，朱婉华，陈钧辉编生物化学实验北京：人民教育出版社，1979 朱检，曹凯鸣，周M庞，蔡武城，袁厚积编著.生物化学实验上海：上海科学技术出 版社，19813．沉淀 RNA 将离心得到的上清液倾于 50ml 烧杯内，并置入放有冰块的 250ml 烧杯中冷却．待冷 至 10℃以下时，用 6mol／L HCI 小心地调节 pH 值至 2.0～2.5（注意严格控制 pH）。调好 后继续于冰水中静置 10min，使沉淀充分，颗粒变大。 4．洗涤和抽滤 上述悬浮液以 4000r／min 离心 10min，得到 RNA 沉淀。将沉淀物放在 10ml 小烧 杯内，用 95％的乙醇 5～10ml 充分搅拌洗涤，然后在布氏漏斗上用射水泵抽气过滤，再用 95％乙醇 5～10ml 淋洗 3 次。 5．干燥 从布氏漏斗上取下沉淀物，放在 6cm 表面皿上，铺成薄层，置于 80℃烘箱内干燥。将 干燥后的 RNA 制品称重，存放于干燥器内。 6．含量测定 将干燥后 RNA 产品配制成浓度为 10—50pg／ml 的溶液，在 751 型分光光度 计上测定其 260nm 处的吸光度，按下式计算 RNA 含量： 式中，A260 为 260nm 处的吸光度；L 为比色杯光径（cm）；0.024 为 lml 溶液含 lμg RNA 的吸光度。 五、结果处理 根据含量测定的结果按下式计算提取率 六、注意事项 1．用浓盐法提取 RNA 时应注意掌握温度，避免在 20～27℃之间停留时间过长，因为 这是磷酸二酯酶和磷酸单酯酶作用活跃的温度范围，会使 RNA 降解而降低提取率。 2．加热至 90～100℃使蛋白质变性，破坏两类磷酸酯酶，有利于 RNA 的提取。 七、思考题 1．沉淀 RNA 之前为什么要冷却上清液至 10℃以下？ 2．为什么要将 pH 调至 2.0～2.5？ 参考文献 文树基。主编基础生物化学实验指导．西安：陕西科学技术出版社，1994 西北农业大学主编基础生物化学实验指导。西安：陕西科学技术出版社，1986 袁玉苏，朱婉华，陈钧辉编生物化学实验北京：人民教育出版社，1979 朱检，曹凯鸣，周 M 庞，蔡武城，袁厚积编著．生物化学实验上海：上海科学技术出 版社，1981