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20min后,将澄清液离心,取离心后的上清液备用。 3-淀粉膏活性的测定 (仙)取试管4支,两支为对照,两支为测定管。 (2)给各试管加入酶提取液1mL,在70℃水浴中准确加热l5min(在此期间,阝淀粉 酶被钝化)。取出试管用自来水冷却。 (3)给各试管加入pH5.6的缓冲液1mL。 (4)给对照管加入0.4 mol/L NaOH溶液4mL(以钝化酶的活性)。再加入1%淀粉溶 液2mL,混匀。 (⑤)将测定管置40℃恒温水浴中保温15min,再加入40℃预热的1%淀粉液2mL。摇 匀后立即放入40℃水浴中准确保温5min。取出后,迅速加入0.4 mol/LNaOH溶液4mL 然后准备下一步糖的测定: (⑥)糖含量的测定 取以上各管中酶作用后的溶液以及对照管中的溶液各2mL,分别加入到25mL具塞 刻度试管中,再加入2mL3,5.二硝基水扬酸试剂混匀,置沸水浴中准确加热5mim,取 出冷却,用蒸馏水稀释至25mL刻度,混匀。在520mm下比色。记录光密度,又标准曲 线求出麦芽糖含量,并铵下式计算酶活性。 4(α+)淀粉酶总活性的测定 取上述酶提取液5mL,放入100mL容量瓶中,用蒸馏水稀定容。混匀后,取4支试 管,两支为对照,两支为测定管。给各管加入稀释过的酶液1mL以及pH5.6的缓冲液 1mL。以下步骤与a-淀粉酶活性的测定中的(4)、(⑤)、(6)湘同。 七、结果计算 a-淀粉酶的活性(麦芽糖mggFW.5min)= (A-A')xV 样品重(g)xC (B-B)×V (a+)淀粉酶的活性(麦芽糟ng.gFW,5min')= 样品重(g)×C 式中:A一-淀粉酶水解淀粉生成麦芽糖的毫克数: A一—Q淀粉酶对照管中麦芽糖含量:
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