可以利用蛋白质的溶解度、大小、电荷和亲和力的差异纯化蛋白质 利用蛋白质的溶解度、大小、电荷和亲和力的差异已经纯化了几千种有活性的蛋白质。 通常将蛋白质混合物进行一系列步骤的纯化探作，各步纯化操作所利用的蛋白质性质不同。 每个纯化步骤都要测定蛋白质活性和蛋白质浓度。有不同的蛋白质纯化技术。 盐析。大多数蛋白质在高盐浓度的溶解度差，这种效应叫盐析(salting out)。各种蛋白质发生 沉淀的盐浓度不同。因此盐析可以用来分离蛋白质。例如0.8M硫酸铵能沉淀纤维蛋白原（血 液凝固蛋白)，而血清白蛋白沉淀所需的盐浓度是2.4M。盐析能用来浓缩浓度稀的蛋白质， 以及用来浓缩其它纯化方法分离的蛋白质。然后用透析的方法除去盐（如果需要）。 透析。透析能够除去蛋白质溶液的小分子物质。这些小分子物质能够透过半透膜（如有孔的 纤维素膜)（图3.2）。比透析膜孔大的分子不能透过半透膜而滞留在透析袋内；比膜孔小的 分子或离子将透过半透膜进入透析液。该技术在脱盐和除去其它小分子方面很有用，但对蛋 白质组分的分离没有意义。 Dialysis bag Concentrated solution Buffer At start of dialysis At equilibrium 困32透析。蛋白质分子（红色）滞留在透析袋内，而小分子（蓝色）扩散到透析液中。 凝胶过滤层析。该技术能更为有效的依靠分子大小分离蛋白质。凝胶过滤层析也叫分子排阻 层析（图33）。层析介质是高度亲水的、水不溶的、多孔聚合物珠如葡聚糖、琼脂糖、或聚 丙烯酰胺。Sephadex,.Sepharose,和Biogel是常用的分子排阻层析的商品介质，其直径是 01μm。层析时，直接将蛋白质溶液上样到充满层析介质柱的顶部。小分子能够进入层析介 质珠孔内，大分子物质不能。结果小分子物质在层析介质珠内外都有，而大分子物质至在层 析介质珠之间。因此大分子能快速流出层析柱，而小分子流出层析柱所需时间长。而那些分 子大小介于大分子和小分子之间的蛋白质，因偶尔能够进入层析珠内，其流出层析柱的时间 介于两者之间。可以利用蛋白质的溶解度、大小、电荷和亲和力的差异纯化蛋白质 利用蛋白质的溶解度、大小、电荷和亲和力的差异已经纯化了几千种有活性的蛋白质。 通常将蛋白质混合物进行一系列步骤的纯化操作，各步纯化操作所利用的蛋白质性质不同。 每个纯化步骤都要测定蛋白质活性和蛋白质浓度。有不同的蛋白质纯化技术。 盐析。大多数蛋白质在高盐浓度的溶解度差，这种效应叫盐析(salting out)。各种蛋白质发生 沉淀的盐浓度不同。因此盐析可以用来分离蛋白质。例如 0.8M 硫酸铵能沉淀纤维蛋白原（血 液凝固蛋白），而血清白蛋白沉淀所需的盐浓度是 2.4M。盐析能用来浓缩浓度稀的蛋白质， 以及用来浓缩其它纯化方法分离的蛋白质。然后用透析的方法除去盐（如果需要）。 透析。透析能够除去蛋白质溶液的小分子物质。这些小分子物质能够透过半透膜（如有孔的 纤维素膜）（图 3.2）。比透析膜孔大的分子不能透过半透膜而滞留在透析袋内；比膜孔小的 分子或离子将透过半透膜进入透析液。该技术在脱盐和除去其它小分子方面很有用，但对蛋 白质组分的分离没有意义。 图 3.2 透析。蛋白质分子（红色）滞留在透析袋内，而小分子（蓝色）扩散到透析液中。 凝胶过滤层析。该技术能更为有效的依靠分子大小分离蛋白质。凝胶过滤层析也叫分子排阻 层析（图 3.3）。层析介质是高度亲水的、水不溶的、多孔聚合物珠如葡聚糖、琼脂糖、或聚 丙烯酰胺。Sephadex, Sepharose，和 Biogel 是常用的分子排阻层析的商品介质，其直径是 0.1m。层析时，直接将蛋白质溶液上样到充满层析介质柱的顶部。小分子能够进入层析介 质珠孔内，大分子物质不能。结果小分子物质在层析介质珠内外都有，而大分子物质至在层 析介质珠之间。因此大分子能快速流出层析柱，而小分子流出层析柱所需时间长。而那些分 子大小介于大分子和小分子之间的蛋白质，因偶尔能够进入层析珠内，其流出层析柱的时间 介于两者之间