算样品的比活性(specific activity)。比活性是样品的酶活性与蛋白质总量之间的比值。理想 状态下，纯化过程中样品的比活性愈来愈高，所获得的乳酸脱氢酶含量愈来念大。纯化的总 目标是让比活性最大化。纯净酶的比活性是一个常数值。 胞内蛋白质的纯化必须从细胞内释放出来 建立检测方案并确定蛋白质来源后，我们将细胞内容物分离成不同组分并确定哪个组分 含含有最多的目标蛋白。具体分离方案取决于所要纯化的蛋白质性质或者根据先前经验进行 一系列的尝试。在第一步，我们要破坏细胞膜，并用离心的方法将细胞匀浆液分离成底部沉 淀（密度高的重材料）和上清液（图3I)。上清液进一步用更大的离心力离心产生另一种沉 淀和上清液。这种离心方案叫差异离心(differential centrifugation),如此生成密度更小的组分。 每个组分含有几百种不同的蛋白质。测定离心产生的各个组分的目标蛋白活性。其中活性最 高的组分用作起始原料，用分离效果更好的纯化技术进一步纯化。 Centrifuge at500×g for 10 minutes Supernatant Homogenate 热 forms 10,000×g Pellet:Nuclear 20 minutes fraction 100,000×g Pellet:Mitochondrial 1 hour fraction Cytoplasm (soluble proteins) Pellet:Microsomal fraction Figure 3-1 Biochemistry,Sixth Edition 2007 W.H.Freeman and Company 图3.1差异离心。用匀浆器匀浆破坏细胞，所形成的混合物叫匀浆液。分步增加离心机的离 心力。能够将密度不同的颗粒沉淀到离心管底部（先是高密度、后是此高密度，如此递减）。 用这种方法分离的不同组分用于后续进一步纯化。[Photographs courtesy of Dr S.Fleischer and Dr B.Fleischer.]算样品的比活性（specific activity）。比活性是样品的酶活性与蛋白质总量之间的比值。理想 状态下，纯化过程中样品的比活性愈来愈高，所获得的乳酸脱氢酶含量愈来愈大。纯化的总 目标是让比活性最大化。纯净酶的比活性是一个常数值。 胞内蛋白质的纯化必须从细胞内释放出来 建立检测方案并确定蛋白质来源后，我们将细胞内容物分离成不同组分并确定哪个组分 含含有最多的目标蛋白。具体分离方案取决于所要纯化的蛋白质性质或者根据先前经验进行 一系列的尝试。在第一步，我们要破坏细胞膜，并用离心的方法将细胞匀浆液分离成底部沉 淀（密度高的重材料）和上清液（图 3.1）。上清液进一步用更大的离心力离心产生另一种沉 淀和上清液。这种离心方案叫差异离心(differential centrifugation)，如此生成密度更小的组分。 每个组分含有几百种不同的蛋白质。测定离心产生的各个组分的目标蛋白活性。其中活性最 高的组分用作起始原料，用分离效果更好的纯化技术进一步纯化。 图 3.1 差异离心。用匀浆器匀浆破坏细胞，所形成的混合物叫匀浆液。分步增加离心机的离 心力。能够将密度不同的颗粒沉淀到离心管底部（先是高密度、后是此高密度，如此递减）。 用这种方法分离的不同组分用于后续进一步纯化。[Photographs courtesy of Dr S.Fleischer and Dr B. Fleischer.]