海洋与湖沼 30卷 织器官的血管、微血管内皮细胞内增殖的结果。除上述分析外,也不能排除GCHV可以 在上述器官和组织中增殖的可能性.因为RT-PCR和 Dot-ELISA技术的灵敏度较电镜技 术要高得多,况且电镜观察结果与电镜样品的制备有很大的关系,往往有较大的漏检性 关于GCHV可寄生的敏感组织和器官问题,需要作进一步的研究 GCHⅤ除能感染卓鱼外,还能感染青鱼、麦穗鱼、布氏餐条、稀有餉鲫和鲢等、并能 使这几种鱼发生出血病而死亡中国科学院水生生物研究所三室病毒组.1978;丁清泉 等、1991).尤其是稀有鹪鲫死亡率高达100%(王铁辉等、1994)。丁清泉等(199I)报道 GCHⅤ能在鲧和布氏餐条体内复制,但不发生出血病,不能感染鯉、团头鲂、泥鳅鳙和鲫 8 GCHv的检测 关于GCHV的检测,电镜观察是最直观而有效的方法,所以在最韧的研究中应用较 多,但是存在着技术和仪器要求复杂、样品制备较麻烦等问题。随着现代免疫学和分子生 物学技术在鱼类病毒检测和诊断中的应用、使GCHV的检测和诊断变得日益简便和快速 (李军等,1996b),杨广志等1991)首先将葡萄球菌A蛋白协同凝集试验( SPA-COA)应用 于GCH的快速检测,具有方法简便、易操作且不需要特殊仪器设备等优点,可以检测纯 化的病毒、培养细胞中感染的病毒以及病鱼组织中的病毒,具有较好的特异性和敏感性 后来,江育林等门993)利用荧光抗体技术(FA)和酶联免疫吸附试验(ELSA)检测 GCHV,也取得了较好的效果,检测灵敏度达到10TCUD/ml.最近、邵健忠等(1996)报 道了快速检测GCHV的 Dot-ELISA方法,并系统比较了该方法与 SPA-COA及常规ELSA 方法的灵敏度,结果显示, Dot-ELISA检出CHV的最低量为3pg,其灵敏度较 SPA-COA 和常规ESA分别提高了10倍和20倍,而且快速易行,更适合于生产应用。王铁辉等 (1997)根据已克隆的GCHV86[病毒株基因组M和S,片段的部分cDNA序列设计合成 了两对引物首先应用逆转录聚合醇链式反应( RT-PCR)技术成功地扩增了GCHV基因 组的特异片段,建立了快速检测GCHV的新方法.应用该技术对纯化的GCHV核酸进行 RT-PCR扩增,最小检测量可达0Ipg病毒核酸对人工感染HⅣ861毒株的草鱼进行 RT-PCR扩增,不仅能检测到发病期显症病鱼中病毒的存在,还能检测发病前期及愈后病 毒携带者中GCHV的存在。该法还能检测自然发病鱼及染毒细胞中GCHV的存在(李军 等,1996a,b,1997: Li et at,1997).可见, RT-PCR技术是目前检测GCHV最为灵敏而特异 的方法,对草鱼出血病的早期诊断和预防及抗病育种都具有重要意义 9草鱼出血病的防治及抗病毒药物的研究 事实上,至今人们还没有研制出能有效抑制和杀灭病毒的药物。目前所采用的只是 一些被动防御措施,或加强机体的免疫防护功能;或创造不利于病毒快速增殖的寄宿内环 境。在70年代,中国科学院水生生物研究所的研究人员曾经对草鱼出血病进行了大量的 药物筛选工作,初步证实了某些药物有抗病毒效能。近年来,朱心玲等(1993)对水产药品 克列奥鱼服康的主药87-05和88-01的抗病毒作用的研究结果表明,两种药对GCHV具有 1)江育林,李艳李正秋,1093.两种快速检测技术试验条件的探索及特性比较.中国水产学会鱼病学分会第 三次鱼病研讨论会论文摘要汇编.武汉450 海 洋 与 湖 沼 3O卷 织 器 官 的 血 管 、微 血 管 内 皮 细 胞 内增 殖 的结 果 。 除 上 述 分 析 外 ，也 不 能排 除 GCHV 可 在上述 器 官和组织 中增殖 的可能性 ，因为 RT-PCR和 Dot-ELISA技术 的灵敏 度较 电镜技 术 要 高 得 多 ，况 且 电 镜 观 察 结 果 与 电 镜 样 品 的制 备 有 很 大 的 关 系 ．往 往 有 较 大 的漏 检 性 关 于 GCHV 可 寄 生 的 敏 感 组 织 和 器 官 问题 ，需 要 作 进 一 步 的 研 究 。 GCHV 除 能 感 染 草 鱼 外 ，还 能 感 染 青 鱼 、麦 穗 鱼 、布 氏 餐 条 、稀 有 量句鲫 和 鲢 等 ，并 能 使 这 几 种 鱼 发 生 出 血 病 而 死 亡 (中 国 科 学 院水 生 生 物 研 究 所 三 室 病 毒 组 ，l978；丁 清 泉 等 ，i99Ij，尤 其 是 稀 有 鲍 鲫 死 亡 率 高 达 100％ (王 镑 辉 等 ，l994)。 丁 清 泉 等 (I99lJ报 道 ， GCHV 能 在 鲢 和 布 氏餐 条 体 内 复 制 ，但 不 发 生 出血 病 ，不 能 感 染 鲤 、团头 鲂 、泥鳅 、鳙 和 鲫 等 8 GC1-Vv"的检 测 关 于 GCHV 的 检 测 ，电 镜 观 察 是 最 直 观 而 有 效 的 方 法 ，所 以 在 最 初 的 研 究 中应 用 较 多，但是存 在着技术和 仪器 要求复杂 ，样品制备 较麻 烦等问题。 随着现代 免疫学和分 子生 物学技术在 鱼类病毒 检测和诊 断中的应用 ，使 GCt-IV的检测和诊 断变得 H益简便和快速 (李 军 等 ，l996b)。杨 广 志 等 (1991)首 先 将 葡 萄球 菌 A 蛋 白协 同凝集 试 验 (SPA~coA)应 用 于 GCHV的快 速检 测 ，具 有方法 简便 易 操作且不需要 特殊仪 器设 备等优点 ，可 检测纯 化 的 病 毒 、培 养 细 胞 中感 染 的病 毒 及 病 鱼 组 织 中 的病 毒 ，具 有 较 好 的 特 异 性 和 敏 感 性 后 来 ，江 育 林 等 (1993)”利 用 荧 光 抗 体 技 术 (FA)和 酶 联 免 疫 吸附 试 验 (ELISA)检 测 GCHV，也 取 得 了 较 好 的效 果 ，检 测 灵 敏 度 达 到 l0~I'CID ／I111。 最 近 ，邵 健 忠 等 (1996)报 道 了快 速 检 测 GCHV 的 Dot-ELISA方 法 ，并 系 统 比较 了 该方 法 与 SPA_coA及 常规 ELISA 方 法 的 灵 敏 度 ，结 果 显示 ，Dot-ELISA检 出 GCHV 的 最 低 量 为 3pg，其 灵 敏 度 较 SPA~coA 和 常规 ELISA分别 提 高 了 l0倍和 20倍，而且 快 速易行 ，更 适合 于生 产应 用。王铁辉 等 (1997)根据 已克隆 的 GCHV861病 毒株 基 因组 M 和 s片 段的部分 cDNA序列 ，设 计合成 了两对 引物 ，首先应 用逆 转录 聚合酶链 式反 应 (RT-PCR)技 术成功 地扩 增了 GCHV基 因 组 的特 异 片 段 ，建 立 了快 速 检 测 GCt-IV 的新 方 法 。应 用 该 技 术 对 纯 化 的 GCHV 核 酸 进行 RT-PC R扩 增 ，最 小 检 测 量 可 达 0．1pg病 毒 桉 酸 对 人 工 感 染 GCHV861毒 株 的 草 鱼 进 行 RT-PC R扩 增，不仅能检 测到发病期 显症病 鱼 中病毒 的存在 ，还 能检测 发病前期 及愈后病 毒携带者 中 GCHV 的存在 。该法还能检测 自然发病鱼及染 毒细胞 中 GCHV的存 在 (李军 等 ，l996a,b，l997；IA eta1．1997) 可 见 ，RT-PC R~ 术 是 目前 检 测 GCHV 最 为 灵 敏 而 特 异 的 方 法 ，对草 鱼 出血病 的 早 期 诊 断和 预 防 ，及 抗 病 育 种 都 具 有 重要 意义 。 9 草鱼出血病的防治及抗病毒药物的研究 事 实上 ，至今人们 还没有 研制 出能有效抑制 和 杀灭病毒 的药物。 目前所 采用 的只是 一 些 被动防御措施 ，或加 强机 体的免疫防护功 能；或创造 不利于病 毒快速增殖 的寄宿 内环 境 。在 70年代，中国科学院水生 生物 研究所 的研究 人员曾经对草鱼 出血病进行 了大量 的 药物筛 选工作，初 步证 实 了某些 药物 有抗病毒效 能 近年来 ，朱 心玲等 (1993)对水产药 品 克列奥鱼服康 的主 药 87-05和 88 l的抗 病毒 怍用的研究结果表 明，两种药对 GCHV具有 1) 江育林 ．李 艳 ，李正 秋 ，I993．两种快 速幢测 拄术试 验条件 的探索 厦特 性 比较 中国水产学 会鱼病 学分 会第 三攻鱼病研 讨论 会论文 摘要汇 编 武祝 维普资讯 http://www.cqvip.com