细菌质松 响乳动物DNA 片段啾制性内 Hpa II 限制性内切剩 Hpa D Gcc 准合，退火 DNA连接乘 舆离袋瓷隔经教D从片风 图20-5同一限制酶切割DNA粘性末端的连接 不同的限制性内切酶切，如果产生的DNA的粘末端相同，也同样可用此法连接，如识别6bp序列的BamHI和识别4bp序列的Sau3aI切割 DNA后都产生5'突出粘性未端GATC,可以互补结合连接。 如果在连接的两个DNA片段没有能互补的粘性末端，可用末湍核苷酸转移酶催化脱氨单核苷酸添加DNA的3末端，例如一般DNA3'端加 上polyG,另一股DNA加上polyC,这样人工在DNA两端做出能互补的共核苷酸多聚物粘性未端，退炎后能结合连接（图2O-6),这样方法称 为同聚物加尾法。 载体DNA 目的DNA dGTP 。未瘤脱氧铁B脑转移隔一 PolyG Polyc PolyC PolyG 图20-6同聚物加尾连拉法 对平未端的DNA,也可先连上人工设计合成的脱氧寡核苷酸双链接头，使DNA未端产生新的限制内切酶位点，经内切酶割后，即可按粘 性未端相连（图20-7）。 川中动清持新样夏￥ N弟见的城 心t4和制 MR基香瓶 CrrCAGCICVCe( A花 图20-7人工接头连接法 二、平末端连接 T4DNA连接酶也能催化限制性内切酶切割产生DNA平末端的连接。如果目的序列和载体上没有相同的限制性内切酶位点可供利用，用不 同的限制性内切酶切割后的粘性未端不能互补结合，则可用适当的酶将DNA突出的未端削平或补齐成平未端，再用T4DNA连接酶连接，但平图20-5 同一限制酶切割DNA粘性末端的连接 不同的限制性内切酶切，如果产生的DNA的粘末端相同，也同样可用此法连接，如识别6bp序列的BamHⅠ和识别4bp序列的Sau3aⅠ切割 DNA后都产生5’突出粘性末端GATC，可以互补结合连接。 如果在连接的两个DNA片段没有能互补的粘性末端，可用末湍核苷酸转移酶催化脱氨单核苷酸添加DNA的3’末端，例如一般DNA3’端加 上polyG，另一股DNA加上polyC，这样人工在DNA两端做出能互补的共核苷酸多聚物粘性末端，退炎后能结合连接（图20-6），这样方法称 为同聚物加尾法。 图20-6 同聚物加尾连拉法 对平末端的DNA，也可先连上人工设计合成的脱氧寡核苷酸双链接头，使DNA末端产生新的限制内切酶位点，经内切酶割后，即可按粘 性末端相连（图20-7）。 图20-7 人工接头连接法 二、平末端连接 T4DNA连接酶也能催化限制性内切酶切割产生DNA平末端的连接。如果目的序列和载体上没有相同的限制性内切酶位点可供利用，用不 同的限制性内切酶切割后的粘性末端不能互补结合，则可用适当的酶将DNA突出的末端削平或补齐成平末端，再用T4DNA连接酶连接，但平