标记抗体民被检抗原的结合方式有两种。一是直接法，即如上述用标记抗体与样品中的抗 原直接结合（图1~8）。这种方法操作简便，但敏感度不及间接法。间接法是将分离的抗体 (第一抗体简称一抗)再作为抗原免疫另一种动物，制备该抗体（抗原）的抗体（第二抗体简 称二抗)，再以标记物标记二抗。先后以一抗和标记二抗处理样品，最终形成抗原一抗·标记 二抗复合物（图1~8）。间接法中的一个抗原分子可通过一抗与多个标记二抗相结合，因此它 的敏感度较高，而且目前国内外均有多种标记二抗商品供应，使用方便。间接法中较常用的是 一种称之为过氧化物酶·抗过氧化物酶复合物法（peroxidase-antiperoxidase complexmethod,PAS法)，该法除需一抗和二抗外，还需制备HRP标记的抗酶抗体，即以HRP 作为抗原免疫动物，制成抗HRP抗体，再以HRP标记该抗体制成由3个酶分子与2个抗酶抗体组 成的相当稳定的环形PAP复合物。标本先后以一抗、二抗和PAP复合物处理后，再以DAB显 色，即可检测抗原的分布。此法由于细胞内的抗原通过抗体的层层放大而与多个酶分子结合 因此敏感性很强（图1-9）。 标记抗体 十·第抗体 标本 图抗原 图1-8免疫细胞化学直接法(A)与间接法(B)示意图 -PAP合物 第二抗体---心 一一第二抗休 -·-一第-拉 图1-9免疫细胞化学PAP法示意图 免疫细胞化学术近10年来又有新进展，如生物素·亲合素等新颖试剂的应用，为检测微量 抗原、受体、抗体开辟了新途径。生物素(biotir)又称维生素H,是从卵黄和肝中提取的一种 小分子物质（分子量244.3l);亲合素(avidin)又称卵白素，是从卵白中提取的一种糖蛋白 (分子量68kD)。每个亲合素分子有生物素结合的4个位点，二者可牢固结合成不可逆的复合 物。生物素-亲合素的应用大致有三种方法。①标记亲合素-生物素法(labelled avidin- biotin method,LAB法)：将亲合素与标记物(HRP)结合，一个亲合素可结合多个HRP;将 生物素与抗体（一抗与二抗）结合，一个抗体分子可连接多个生物素分子，抗体的活性不受影 响。细胞的抗原（或通过一抗）先与生物素化的抗体结合，继而将标记亲合素结合在抗体的生 物素上，如此多层放大提高了检测抗原的敏感性（图1~10）。②桥连亲合素~生物素法 标记抗体民被检抗原的结合方式有两种。一是直接法，即如上述用标记抗体与样品中的抗 原直接结合（图1－8）。这种方法操作简便，但敏感度不及间接法。间接法是将分离的抗体 （第一抗体简称一抗）再作为抗原免疫另一种动物，制备该抗体（抗原）的抗体（第二抗体简 称二抗），再以标记物标记二抗。先后以一抗和标记二抗处理样品，最终形成抗原一抗－标记 二抗复合物（图1－8）。间接法中的一个抗原分子可通过一抗与多个标记二抗相结合，因此它 的敏感度较高，而且目前国内外均有多种标记二抗商品供应，使用方便。间接法中较常用的是 一 种 称 之 为 过 氧 化 物 酶 － 抗 过 氧 化 物 酶 复 合 物 法 （ peroxidase-antiperoxidase complexmethod,PAS法），该法除需一抗和二抗外，还需制备HRP标记的抗酶抗体，即以HRP 作为抗原免疫动物，制成抗HRP抗体，再以HRP标记该抗体制成由3个酶分子与2个抗酶抗体组 成的相当稳定的环形PAP复合物。标本先后以一抗、二抗和PAP复合物处理后，再以DAB显 色，即可检测抗原的分布。此法由于细胞内的抗原通过抗体的层层放大而与多个酶分子结合， 因此敏感性很强（图1－9）。 图1－8 免疫细胞化学直接法（A）与间接法（B）示意图 图1－9 免疫细胞化学PAP法示意图 免疫细胞化学术近10年来又有新进展，如生物素－亲合素等新颖试剂的应用，为检测微量 抗原、受体、抗体开辟了新途径。生物素（biotin）又称维生素H，是从卵黄和肝中提取的一种 小分子物质（分子量244.31）；亲合素（avidin）又称卵白素，是从卵白中提取的一种糖蛋白 （分子量68kD）。每个亲合素分子有生物素结合的4个位点，二者可牢固结合成不可逆的复合 物。生物素－亲合素的应用大致有三种方法。①标记亲合素－生物素法（labelled avidin￾biotin method,LAB法）：将亲合素与标记物（HRP）结合，一个亲合素可结合多个HRP；将 生物素与抗体（一抗与二抗）结合，一个抗体分子可连接多个生物素分子，抗体的活性不受影 响。细胞的抗原（或通过一抗）先与生物素化的抗体结合，继而将标记亲合素结合在抗体的生 物素上，如此多层放大提高了检测抗原的敏感性（图1－10）。②桥连亲合素－生物素法