的某些蛋白质如DnaA能结合至DNA复制起始部位，DnaB具有解链酶的作用，DnaC辅 助DnaB结合到复制起始点，使起始部位的双链解开。而引发体中的引物酶(primase)在己 解开起始部位的DNA单链按碱基互补配对催化NTP聚合，合成一小片段的RNA,作为 DNA合成的引物，即沿此引物RNA的3'-OH进行延伸。 五、DNA连接酶 DNA连接酶(DNA ligase)催化两段DNA链之间磷酸二酯键的形成。要求DNA链 3端有游离的OH,而5端带有磷酸根，连接过程需要ATP供能，如图12-9。 DNA连接酶不能连接两分子单链的DNA,只能作用双链DNA分子中一股链上的缺口， 或双链DNA分子双股的缺口。如DNA经限制性内切核酸酶切割后，两个片段的粘性末端 相配，DNA连接酶能使之连接。即使是两段平齐DNA,DNA连接酶也能使之连接。在 DNA复制过程中，当RNA引物清除后，靠DNA聚合酶I填补空缺，冈崎片段之间的缺 口靠DNA连接酶作用而连成完整的一条新链。DNA连接酶在DNA损伤修复中亦起重要 作用，并且是一种重要的工具酶。 第三节DNA复制过程 一、DNA聚合反应必备的条件 (I)DNA聚合酶 (②)DNA模板（反转录时用RNA模板） (3)引物(DNA、RNA或蛋白质) (④4种dNTP (⑤Mg2+ 二、聚合反应过程及特点 总反应式： nidATP DNApol. dAMP n2dGTP +DNA dGMP DNA+(ni+n2+n3+n4)PPi n3dCTP Mg2+ dCMP nadTTP dTMP (一)复制的起始（双链解开，RNA引物合成） 大肠杆菌复制时有特定的起始部位称为oC,长度为245bp。有3个串连排列的核苷 酸序列，每个由13个核苷酸组成。其序列基本相同为GATCINTINTTTT,而且GATC在 oriC部位出现I1次，oriC还有4个DnaA结合位点，是4个bp序列的反向重复，这些 序列都是高度保守的（图12-10。） DnaA先结合至复制起始点，然后发动了复杂的变化。DnaB和DnaC亦参加进去，从 而使双链解开，DNA结合蛋白便与单链DNA结合。接着引物酶按碱基配对原则按5'→3 方向合成一小段的RNA引物，此引物的3'-OH可供DNA聚合酶将第一个dNTP加到 的某些蛋白质如 DnaA 能结合至 DNA 复制起始部位，DnaB 具有解链酶的作用，DnaC 辅 助 DnaB 结合到复制起始点，使起始部位的双链解开。而引发体中的引物酶(primase)在已 解开起始部位的 DNA 单链按碱基互补配对催化 NTP 聚合，合成一小片段的 RNA，作为 DNA 合成的引物，即沿此引物 RNA 的 3′-OH 进行延伸。 五、DNA 连接酶 DNA 连接酶(DNA 1igase)催化两段 DNA 链之间磷酸二酯键的形成。要求 DNA 链 3′端有游离的 OH，而 5′端带有磷酸根，连接过程需要 ATP 供能,如图 12-9。 DNA 连接酶不能连接两分子单链的 DNA，只能作用双链 DNA 分子中一股链上的缺口， 或双链 DNA 分子双股的缺口。如 DNA 经限制性内切核酸酶切割后，两个片段的粘性末端 相配，DNA 连接酶能使之连接。即使是两段平齐 DNA，DNA 连接酶也能使之连接。在 DNA 复制过程中，当 RNA 引物清除后，靠 DNA 聚合酶Ⅰ填补空缺，冈崎片段之间的缺 口靠 DNA 连接酶作用而连成完整的一条新链。DNA 连接酶在 DNA 损伤修复中亦起重要 作用，并且是一种重要的工具酶。 第三节 DNA 复制过程 一、DNA 聚合反应必备的条件 ⑴ DNA 聚合酶 ⑵ DNA 模板(反转录时用 RNA 模板) ⑶引物 (DNA、RNA 或蛋白质) ⑷ 4 种 dNTP ⑸ Mg2+ 二、聚合反应过程及特点 总反应式： n1dATP DNA pol . dAMP n2dGTP +DNA dGMP DNA+（n1+n2+n3+n4）PPi n3dCTP Mg2+ dCMP n4dTTP dTMP （一）复制的起始（双链解开，RNA 引物合成） 大肠杆菌复制时有特定的起始部位称为 oriC，长度为 245bp。有 3 个串连排列的核苷 酸序列，每个由 13 个核苷酸组成。其序列基本相同为 GATCTNTTNTTTT，而且 GATC 在 oriC 部位出现 11 次，oriC 还有 4 个 DnaA 结合位点，是 4 个 9bp 序列的反向重复，这些 序列都是高度保守的（图 12-10。） DnaA 先结合至复制起始点，然后发动了复杂的变化。DnaB 和 DnaC 亦参加进去，从 而使双链解开，DNA 结合蛋白便与单链 DNA 结合。接着引物酶按碱基配对原则按 5’→3’ 方向合成一小段的 RNA 引物，此引物的 3′-OH 可供 DNA 聚合酶Ⅲ将第一个 dNTP 加到