江苏食晶些蠱馳工覆系鲁佩笔记 议扮 紫外可见分光光度计 基本结构结构:紫外可见分光光度计一般由光源、单色器、吸收池、检测器以及数据处理及记录 (计算机)等部分组成。 单光束分光光度计 单波长 分类(按波长 双光束分光光度计 双波长分光光度计 31单波长单光束分光光度计(P8图2-10) 光源 单色器 吸收池 检测器 读出装置 (样品槽) 721、722及751型分光光度计的工作原理如图所示:(首先仪器预热30MIN)光源发出的混合光经过 单色器分光,得到平行单色光。(将装有参比或空白溶液的比色皿加入吸收池,调节A为零或T为100% 然后将装有待测液的比色皿加入吸收池中测定。)平行单色光通过吸收池后,出射光照射在检测器上转换 成电信号,并有读出装置显示吸光度值 (1)光源:作用是提供激发能,使待测分子吸收产生跃迁。要求光源能发出足够强的连续光谱,并 具有良好的稳定性,且辐射能量随波长无明显变化 紫外可见分光光度计采用的光源有热辐射光源和气体放电光源。利用固体灯丝材料高温放热产生的辐 射作为光源的是热辐射光源,如钨灯(340-2500nm)、卤钨灯。气体放热光源是在低压直流电条件下,氢 气或氘(dao)气放电所产生的连续辐射。一般为氢灯或氘等,他们在近自外区测定时使用。他们可以在 160-360nm范围内产生连续辐射。 (2)单色器:单色器是从光源发出的复合光中分离出所需要的单色光的光学装置。P18图2-11 (3)吸收池:也成为比色皿,用于盛放分析试样,一般有石英和玻璃两种。石英比色皿适合与用于 可见紫外区的测量。玻璃池只用于可见区。为了减少反射损失,吸收池的光学面必须完全垂直于光束方向。 (4)检测器:检测光信号,测量单色光通过溶液后光强度的变化,并将光信号转变成电信号。常用光 电池或光电管作为检测器。 3.2单波长双光束分光光度计 单光束仪器中,分光后的单色光直接通过比色皿,分别通过样品和参比溶液(利用拉杆)。适合与特 定波长的吸收。在双光束仪器中,从光源发出的光经过反射镜后分成相等的两束光,一束通过参比池 束通过待测溶液;最后测定的是两者的光信号强度差 优点是克服了单光束仪器由于光源不稳定引起的误差,并且可以方便的对全波段进行扫描。 3.3双波长分光光度计(略) 也可以作为单波长双光束分光光度计。 优点是可以降低杂散光,光谱精度高 5.定性分析 5.1原理:紫外可见光谱鉴定有机化合物,通常是在相同的测定条件下,比较未知物与已知化合物的 紫外可见吸收光谱图,若两者的谱图相同,则可知待测化合物与已知化合物具有相同的生色团。这也说明 有时候两种化合物的紫外可见吸收光谱图相同,但两者的结构不一定相同。有时候不同的分子结构产生相 同的吸收光谱(但此时他们的吸光系数是不同的,所以在比较他们的Aax的同时也要比较它们的e=x。如 果他们的λmx和εm都相同则是同一种物质)。江苏食品学院生物工程系备课笔记 仪器分析 5 4. 紫外-可见分光光度计 基本结构结构：紫外-可见分光光度计一般由光源、单色器、吸收池、检测器以及数据处理及记录 （计算机）等部分组成。 单光束分光光度计 单波长 分类（按波长）： 双光束分光光度计 双波长分光光度计 3.1 单波长单光束分光光度计（P18 图 2-10） 光源 单色器 吸收池 检测器 读出装置 （样品槽） 721、722 及 751 型分光光度计的工作原理如图所示：（首先仪器预热 30MIN）光源发出的混合光经过 单色器分光，得到平行单色光。（将装有参比或空白溶液的比色皿加入吸收池，调节 A 为零或 T 为 100%， 然后将装有待测液的比色皿加入吸收池中测定。）平行单色光通过吸收池后，出射光照射在检测器上转换 成电信号，并有读出装置显示吸光度值。 （1）光源：作用是提供激发能，使待测分子吸收产生跃迁。要求光源能发出足够强的连续光谱，并 具有良好的稳定性，且辐射能量随波长无明显变化。 紫外-可见分光光度计采用的光源有热辐射光源和气体放电光源。利用固体灯丝材料高温放热产生的辐 射作为光源的是热辐射光源，如钨灯（340-2500nm）、卤钨灯。气体放热光源是在低压直流电条件下，氢 气或氘（dao）气放电所产生的连续辐射。一般为氢灯或氘等，他们在近自外区测定时使用。他们可以在 160-360nm 范围内产生连续辐射。 （2）单色器：单色器是从光源发出的复合光中分离出所需要的单色光的光学装置。P18 图 2-11 （3）吸收池：也成为比色皿，用于盛放分析试样，一般有石英和玻璃两种。石英比色皿适合与用于 可见-紫外区的测量。玻璃池只用于可见区。为了减少反射损失，吸收池的光学面必须完全垂直于光束方向。 （4）检测器：检测光信号，测量单色光通过溶液后光强度的变化，并将光信号转变成电信号。常用光 电池或光电管作为检测器。 3.2 单波长双光束分光光度计 单光束仪器中，分光后的单色光直接通过比色皿，分别通过样品和参比溶液（利用拉杆）。适合与特 定波长的吸收。在双光束仪器中，从光源发出的光经过反射镜后分成相等的两束光，一束通过参比池，一 束通过待测溶液；最后测定的是两者的光信号强度差。 优点是克服了单光束仪器由于光源不稳定引起的误差，并且可以方便的对全波段进行扫描。 3.3 双波长分光光度计（略） 也可以作为单波长双光束分光光度计。 优点是可以降低杂散光，光谱精度高。 5. 定性分析 5.1 原理：紫外-可见光谱鉴定有机化合物，通常是在相同的测定条件下，比较未知物与已知化合物的 紫外-可见吸收光谱图，若两者的谱图相同，则可知待测化合物与已知化合物具有相同的生色团。这也说明 有时候两种化合物的紫外-可见吸收光谱图相同，但两者的结构不一定相同。有时候不同的分子结构产生相 同的吸收光谱（但此时他们的吸光系数是不同的，所以在比较他们的λmax 的同时也要比较它们的εmax。如 果他们的λmax 和εmax 都相同则是同一种物质）