实验九单胞菌的人工感染与分离 一、实验目的 熟悉单胞菌的形态特征及培养特点，鱼类病原菌分离鉴定的基本方法，巩固单胞菌所致鱼 病的基本特性及症状。 二、实验材料 单胞菌株纯培养物普通琼脂平板鲜血琼脂平板普通肉汤无菌蒸馏水解剖刀剪刀镊子纱 布白瓷盘洁净的玻片平皿光学显微镜一次性注射器针头记号笔酒精棉球饵料玻璃注射 器水族箱气泵控温仪吸管洗耳球灭菌试管实验用鲫鱼生理盐水温度计捞网 三、实验操作程序 1.单胞菌株的纯培养 【培养基] (1)普通肉汤培养基：按以下剂量称取各种试剂（先称取盐类再称蛋白胨及牛肉膏） 置于铝锅或塘瓷缸中。 牛肉膏5g磷酸氢二钾1g 蛋白陈10g蒸馏水1000ml 氯化钠5gpH7.4~7.6 初配好的培养基呈酸性故要用NaOH调整。将pH测定后的肉汤培养基用滤纸过滤，将过 滤好的肉汤分装试管、盐水瓶、三角烧瓶等容器，待灭菌。 （2)普通营养琼脂培养基 普通肉汤1000ml 琼脂20g 琼脂是由海藻中提取得一种多糖类物质，对病原性细菌无营养作用，但在水中加温可融 化，冷却后可凝固。在液体培养基中加入琼脂1.5~2%即可固定培养基，如加入0. 3~0.5%则成半固体培养基。 将称好的琼脂加到普容肉汤中，加热煮沸，待琼脂完全融化后.将p州调至7.4~7.6 琼脂融化过程中需不断搅拌，并控制火力，不使培养基溢出或烧焦，并注意补充蒸发掉的 水份。 加热溶解好的培养基可用滤纸进行过滤，固体培养基要用4层纱布趁热过滤（切勿使培养 基凝固在纱布上)，之后按实验要求，将配制好的培养基分装入试管或三角瓶中，包扎好 待灭菌，将培养基置于高压蒸汽锅内，121℃灭菌15~30min,趁热将试管口一端搁在 玻棒上，使之有一定坡度，凝固后即成普通琼脂斜面，也可直立，凝固后即成高层琼脂。 实验九单胞菌的人工感染与分离 一、实验目的 熟悉单胞菌的形态特征及培养特点，鱼类病原菌分离鉴定的基本方法，巩固单胞菌所致鱼 病的基本特性及症状。 二、实验材料 单胞菌株纯培养物普通琼脂平板鲜血琼脂平板普通肉汤无菌蒸馏水解剖刀剪刀镊子纱 布 白瓷盘洁净的玻片平皿 光学显微镜一次性注射器针头记号笔酒精棉球饵料玻璃注射 器 水族箱气泵 控温仪吸管 洗耳球灭菌试管实验用鲫鱼生理盐水温度计捞网 三、实验操作程序 1 ．单胞菌株的纯培养 [ 培养基] （ 1 ）普通肉汤培养基：按以下剂量称取各种试剂（先称取盐类再称蛋白胨及牛肉膏）， 置于铝锅或搪瓷缸中。 牛肉膏5g 磷酸氢二钾1g 蛋白胨10g 蒸馏水 1000ml 氯化钠5g pH 7 . 4 ～ 7 . 6 初配好的培养基呈酸性故要用NaOH 调整。将pH 测定后的肉汤培养基用滤纸过滤，将过 滤好的肉汤分装试管、盐水瓶、三角烧瓶等容器，待灭菌。 （ 2 ）普通营养琼脂培养基 普通肉汤1000ml 琼脂 20g 琼脂是由海藻中提取得一种多糖类物质，对病原性细菌无营养作用，但在水中加温可融 化，冷却后可凝固。在液体培养基中加入琼脂1 . 5 ～ 2 ％即可固定培养基，如加入0 . 3 ～ 0 . 5 ％则成半固体培养基。 将称好的琼脂加到普容肉汤中，加热煮沸，待琼脂完全融化后，将pH 调至7 . 4 ～ 7 . 6 。 琼脂融化过程中需不断搅拌，并控制火力，不使培养基溢出或烧焦，并注意补充蒸发掉的 水份。 加热溶解好的培养基可用滤纸进行过滤，固体培养基要用4 层纱布趁热过滤（切勿使培养 基凝固在纱布上），之后按实验要求，将配制好的培养基分装入试管或三角瓶中，包扎好 待灭菌，将培养基置于高压蒸汽锅内，121 ℃灭菌15 ～ 30min ，趁热将试管口一端搁在 玻棒上，使之有一定坡度，凝固后即成普通琼脂斜面，也可直立，凝固后即成高层琼脂